文档介绍：中国协和医科大学
硕士学位论文
脐血内皮祖细胞分离、诱导分化及扩增
姓名:张志华
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:丁顺利;韩忠朝
常见英文缩写牛血清白蛋白母细胞湫纬傻ノ去离子水二甲基亚砜内皮祖细胞流式细胞仪胎牛血清异硫氰酸荧光素纤连蛋白造血干细胞造血干,,重度中国协和医科笱渴垦芯縯论文第!./瓸..琒/
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脐血内皮祖细胞分离诱导分化和扩增摘要养液中,观察梭形贴壁细胞的出现时间和特异性细胞标志。用达血管内皮细胞特异性标志—,:从脐血中分离内皮祖细胞,诱导其向内皮细胞分化,研究内皮祖细胞诱导分化条件,选择合适的扩增体系扩增内皮祖细胞。方法采用免疫磁珠分选的方法,从新鲜脐血中纯化出细胞,接种于添加了、、的培、因子组合观察扩增效果。结果培养天可观察到梭形贴壁细胞,天左右可形成索条状结构,贴壁细胞表合。、因子组合可扩增内皮祖细胞。结论脐血中含有内皮祖细胞,在一定的条件下,可扩增并分化为关键词脐血细胞内皮祖细胞分化扩增内皮样细胞。中国协和医科土学硕士研究生论文弟
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】9苌墒侵钢信卟憷丛吹哪谄ぷ嫦赴蜓9芮赴谠进行分化、聚集,形成细胞丛或血岛,血岛逐渐生长,多个血岛融合最终形成心分化为动静脉系统。血管新生是指内皮细胞的增殖和迁移,从先前存在的血管处以发芽或非发芽殖铺椎的形式生成新的毛细血管。发芽式血管新生侵复右延械难9懿啾诨蚨瞬喾⒀砍こ鲂律9堋@如脑的血管发生。在缺血刺激条件下,内皮细胞被激活,从降解的基底膜处迁出,非发芽式血管新生—虺铺椎窖9苄律侵改谄は赴⒀9苤芟赴匮9艹ぶ嵯蜓9腔内长入,把原来的管腔一分为二。例如胚胎时期肺血管的发生。胚胎时期器官生方式在胚胎和成体都存在,成体血管形成的方式只有血管新生一种。内皮祖细胞位于血岛的外周,而造血干细胞位于血岛的中央。内皮祖细胞发育为成熟的内皮细胞,而造血干细胞发育为成熟的血液细胞。内皮祖细胞和造血干细胞有共同的表面抗原,,血液血管干细胞近年来,发现成体中存在内皮祖细胞,这些细胞也可以象胚胎时期的血管发育那样,由内皮祖细胞分化出成熟内皮细胞,从而参与出生后血管生成但内皮祖细胞在出生后血管生成中的具体作用还有待进一步的研究。辏珹却尤送庵苎V蟹掷氲玫紺细胞和细胞,在体外将其诱导分化成内皮细胞,进而在动物肢体缺血模型中看到了这些细胞可脏和大血管的始基以及原始的毛细血管丛,血液循环建立后,原始的毛细血管丛内皮细胞开始增殖,管腔形成,血管周细胞募集,周细胞合成基底膜,稳定血管。生长时,血管新生的类型取决于器官和组织中血管数目的多少。有关血管生成和血管新生的机制还不清楚。传统认为血管生成只存在于胚胎发育阶段,而血管新中国协和医科大学硕士竹究生论文第
以参与血管生成,这些细胞被认为是循环内皮祖细胞。年,从转基因小鼠中进一步证明了在生理和病理情况下,血管新生不只是来自已存在血管内皮出芽形成,骨髓来源的循环内皮祖细胞也参与了生后血管形成【俊4死嘞赴瘸墒斓难诱导分化,了解其定向分化调控机制,引起了广泛的兴趣。内皮祖细胞可以增殖、分化为成熟内皮细胞,并在外周血中循环。但内皮祖细胞还没有获得成熟内皮细胞的标志。虽然有较多证据证明了在胚胎发育过程期胞和造血细胞,分离此类细胞存在困难。目前一些学者采用分离骨髓中血之中有许多造血干细胞,它们具有自我更新能力,脐血千细胞移植对造血重建干细胞。这使我们相信能从脐血中分离内皮祖细胞并诱导分化为内皮细胞,将为今后治疗性血管重建增加新的途径。本文从脐血中分离细胞,成功诱导分化成内皮细胞,但是,每份脐血所含内皮祖细胞有限,为了满足治疗性血管重建要求,需进一步体外扩增内皮祖细胞,我们采用干细胞扩增因子组合,首次尝试扩增内皮祖细胞。管内皮细胞具有更强的增殖能力】R虼嘶袢∧谄ぷ细胞,诱导分化后移植到缺血部位作为治疗性血管重建的来源之一,并通过体外间及生后循环血液中存在内皮祖细胞,但由于缺乏特殊的标志区别于成熟内皮细细胞或经细胞因子动员的外周血中单个核细胞分离内皮祖细胞【俊R丫っ魅似有很好的作用。近来已经证明造血干细胞和血管母细胞来自同一祖先一血液血管第,页干国协和医科土学硕士研究生论文甋