文档介绍：泸州医学院学报年第卷第期
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伪狂犬病病毒—株主要抗原表位
基因的克隆与鉴定
王丽,宋杰,刘晓燕,梅志强,何涛
泸州医学院医学分子生物学实验室。四川泸州
摘要目的:获得主要抗原表位基因,构建重组表达载体。方法:根据伪狂犬病病毒—株基因
序列,设计一对引物,采用方法扩增基因主要抗原表位区约的片段,将产物克隆到一载体中,测
序正确后再将其亚克隆到原核表达载体中,提取质粒作限制性内切酶分析和序列测定。结果:限制性核酸内切酶酶切
鉴定表明,扩增出了主要抗原表位基因,测序结果经分析与中注册的序列完全一致。结论:成功克隆
了主要抗原表位基因的原核表达载体。
关键词伪狂犬病病毒;基因;克隆
中图分类号. 文献标识码文章编号—
Ⅵ
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伪狂犬病,是由伪狂犬病病毒感染动物,从而有效防止的进一步扩散。本研
.引起的多种家畜和野生动究以此为出发点,拟通过技术扩增—
物感染的一种急性传染病,临床以发热、流产、死产株的主要抗原表位基因,构建原核表达载体,为
和脑脊髓炎为特,征【”。猪是该病毒的主要贮存宿主和诊断试剂盒的研制奠定基础。
传染来源,
材料与方法
为繁殖障碍,症状与细小病毒、猪瘟病毒、猪呼吸繁
殖障碍综合征病毒、乙脑病毒等较为相似而难以鉴. 材料
别。该病的流行给我国养猪业造成巨大的经济损失。克隆载体一、表达载体一、大肠
研究发现,为的重要毒力基因和非必需基杆菌为本实验室保存:限制性内切酶、
因,通过血清学检测可区分疫苗免疫动物和野毒株和酶、酶、购自大连宝
作者简介:王丽一,女,讲师,硕士生物公司; 片段快速回收试剂盒购于北京鼎国
第期王丽等:伪狂犬病病毒—株主要抗原表位基因的克隆与鉴定
公司:标准核酸相对分子质量性克隆送上海生物工程有限公司进行序列测定。
购自北京天为时代公司;其它试剂均为国产分析纯。
结果
方法
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按文献资料介绍的常规方法制备细胞以提取的为模板。用设计合成的特
悬液,以×细胞/接种孔细胞培养板。待异性引物经扩增后,琼脂糖凝胶电泳检测显示
生长成单层后,倾去营养液,维持液洗一遍后为大小约的片段,与预期片段大小相符见
加入进行病毒接种,℃培养约—,待细胞图。
全部发生明显的细胞病变% 时,收获细胞。
洗涤后加入细胞裂解液,℃水浴作用。取上
清液分别加入等体积的饱和酚和氯仿:异戊醇
:,抽提次,乙醇沉淀、洗涤、干燥后加适量含
。
引物设计与合成
参照上公布的基因序列—
.设计对引物,序列为:
: △. ;.基因的产物
图基因的扩增结果
:△△. 重组克隆载体的鉴定
/连接产物转化转化大肠杆菌,菌落用
扩增片段的大小为,
要抗原表位的片段。由上海生物工程有限公司合成。片段介于和间见图~。提取的重
..,
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应体系为: