文档介绍：人心肌肌酸激酶MB同功酶克隆及原核表达李子颖作者单位:原子高科股份有限公司(北京102413);2中国食品药品检定研究院(北京100050);3中国原子能科学研究院通讯作者:李子颖,E-mail:ciaelee@,贾娟娟2,刘一兵1,韩世泉3【摘要】目构建人肌酸激酶MB同工酶原核表达系统,纯化重组酶蛋白并检测其活性。方法从购买含CKM、CKB基因片段质粒中扩增人肌酸激酶M、B亚基基因,构建pGEX-4T-1-(DE3)GST原核表达系统。以异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。利用重组蛋白GST标签亲与层析纯化。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定与预期相符,诱导表达后细菌裂解液纯化后SDS—PAGE在分子量110,000(CKMB)处显示单一蛋白条带,采用酶联免疫剖析方法进行免疫活性实验,所得蛋白与CKB、CKM抗体都有免疫结合。结论成功表达并纯化了人肌酸激酶MB同工酶。【关键词】:人肌酸激酶MB同工酶;原核细胞;基因表达Cloningandprokaryoticexpressionofhumncreatinekinase-MBisoenzyme(CK-MB)LiZi-ying*,JiaJuan-juan,LiuYi-bing,HanShi-quan(*AtomHighTechCo.,Ltd.,Beijing,102413,China)【Abstract】hewholegeneofhumancreatinekinaseMBisoenzyme(CK-MB)ells,binantCK-MBanddetermineitsantigen-、CKBgenewereamplifiedfromplasmidweboughtandinsertintoprokaryoticexpressionvectorpGEX-4T--4T-1-(DE3),thendeterminedantigen-、binantpGEX-4T-1--ellsandpurified.[Keywords]Humncreatinekinase-MBisoenzyme;ells;Geneexpression急性心肌梗死(acutemyocardialinfarctionAMI)患者存活率关键是早期快速诊断,因为心肌细胞在梗死6h后通常不可逆转。对于诊断急性心肌梗死(AMI),目前心肌标志物中肌酸激酶(creatinekinaseMB,CK-MB