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医学分子生物学与实验.doc

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医学分子生物学与实验.doc

上传人:s0012230 2020/5/8 文件大小:33 KB

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文档介绍

文档介绍:,DNA,RNA提取的大致过程及原理。答:共同的第一步都是取动物组织进行清洗剪碎,然后用高速组织捣碎机破碎。DNA的提取:通过匀浆、离心得到细胞核组分,然后用SDS(十二烷基硫酸钠,sodiumdodecylsulfate裂解核膜,释放出DNA-蛋白质复合物,再加入高浓度NaCl,以增加DNP的溶解度,然后加入***仿—异戊醇混合液,振荡、乳化,使蛋白质变性,DNP复合物解离,离心后,DNA溶于上层水相,蛋白质沉淀夹在水相和有机相之间得以除去,最后用有机溶剂沉淀出DNA。RNA的提取:取组织,剪成小块,在乳钵种研碎,加20mLSDS-缓冲盐溶液(,倒入磨口具塞锥形瓶内,再加同样体积的含水酚液,室温下剧烈振荡10分钟。置冰浴中分层,在0-4℃下,以4000rpmn离心15分钟。吸出上清液,加等体积***仿-异戊醇,室温下剧烈振荡10分钟,以4000rpm离心5分钟,或在室温下放置10分钟使分层。吸出上清液(若有必要,该操作可反复多次,加2倍体积2%乙酸钾的乙醇溶液,在冰浴中放置1小时使RNA沉淀,此沉淀液可在冰箱内较长期存放。若要得到干燥制品,可将沉淀液以4000rpm离心10分钟,倾去上清液。沉淀用少许75%乙醇、95%乙醇、无水乙醇各洗1次,同上法离心,倾去乙醇后,空气干燥。蛋白质的提取:,切小块放入管中。(1ml抽提试剂中加入5μl蛋白酶抑制剂混合液,5μlPMSF和5ul磷酸酶混合液。(250mg组织中加入1ml抽提试剂。,每次匀浆间隔冰浴1分钟,至组织完全裂解。,000xg离心15分钟。上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。原理:在细胞核内,核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物,因此在提取和制备DNA或RNA时,首先必须设法将这两类核蛋白分开。在不同浓度的盐溶液中,RNP与DNP的溶解度有很大的差别。在低浓度的NaCl溶液中,DNP的溶解度随着NaCl浓度的增加而逐渐下降,,DNP的溶解度仅为其在纯水中溶解度的1%,而当NaCl浓度继续增加时,DNP的溶解度又渐次增大,,DNP的溶解度约与其在纯水中的溶解度近似,,DNP的溶解度约为其在纯水中的溶解度的两倍,且随着盐浓度的上升,其溶解度仍继续呈增大的趋势。但RNP则与之不同,,DNP溶解度很低,而RNP的溶解度仍相当大,因此,,使DNP仍保持在沉淀中,然后使用浓盐溶液(。提取出DNA或RNA-蛋白质复合体(DNP后,。答:基因工程(icengineering又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。所谓基因工