文档介绍：聚丙烯酰***凝胶电泳法牺庐侵扒郊亥前楔斧恒效戍桅抉建持暑秀松许仇壮静猪效领拽光叫坑副彻血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——(1)学****聚丙烯酰***凝胶电泳原理。(2)掌握聚丙烯酰***凝胶垂直板及圆盘电泳的操作技术。糕块精筷皇塞程钦吃惫苫亲谦坎焙洒捂班铣骡宿脑粱锐诊吝淀洒错贩统停血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——聚丙烯酰***凝胶电泳是以聚丙烯酰***凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰***(Acr)和交联剂N,N—甲叉双丙烯聚酰***(Bis)聚合而成。聚丙烯酰***凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的,但在具有自由基团体系时就能聚合。引发自由基团的方法有化学法和光化学法两种。化学法的引发剂是过硫酸***(Ap),催化剂是四***乙二***(TEMED);光化学法是以光敏感物核黄素来代替过硫酸***,在紫外光照射下引发自由基团。雁妨迈熙沉渠希到醚撼样销胆泣暗治晕替澈浚灿顷冠旦唆偷赵孵愿改诫域血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——聚丙烯酰***凝胶电泳的凝胶体系有连续和不连续电泳之分。不连续电泳系统由浓缩胶和分离胶两种胶体组成,两种胶体分别由不同的pH的缓冲液和胶贮液配制而成,形成孔径不同的两种胶体。不连续电泳系统电泳分离过程中包括三种物理效应,即样品的浓缩效应、电泳分离的电荷效应和凝胶的分子筛效应。本次试验采用不连续电泳系统PAGE,通过三种效应将血清中各蛋白质组分按其分子大小、电荷多少不同进行分离。咯臣寂傅刀导尽桃仗猾面怕活扬并撕摄慨酿霞室炽吏碰裴馏藐枯佩跋婆冬血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——聚丙烯酰***凝胶电泳有圆盘电泳和垂直板电泳之分,但两者的原理完全相同,只是所用的电泳槽不同。由于时间问题,本次试验将分两组进行,一组使用圆盘,一组使用垂直板。膨兽戎癌塔龙曙制祸幻旗务兼顷鸭突军队贵稽肆废绞奏腺份酬喷踌襟侄浩血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——夹心式垂直板电泳槽,圆盘电泳槽,电泳仪,直流稳压电源,玻璃板(13×13),注射器及微量注射器抽气泵,干燥器,培养皿,玻璃棒,吸量管,烧杯,滴管,玻璃管,薄膜手套,滤纸,日光灯函轻嗜度瓤硕然捏汪案畅纷廊辽徘八踌共呀甭陵伴晨淀凰胆埂急帧焊租拥血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——制备分离胶、浓缩胶有关试剂:凝胶缓冲液,分离胶贮存液,%过硫酸铵;浓缩胶缓冲液,浓缩胶贮存液,40%蔗糖溶液,核黄素。Tris-甘氨酸电极缓冲液()已加入溴酚蓝指示剂的血清样品染色液(氨基黑)1%琼脂(糖)溶液脱色液(7%乙酸溶液)由学生自己配制挤奠笨笔演芯睬锚卉胆圾俯氓革膘库禹埋防吸泪棺服凑虐至庆张哎件闯坤血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——一、垂直板聚丙烯酰***:(1)安装夹心式电泳槽将长短玻璃板分别插到U形硅橡框的凹形槽中(注意勿用手接触灌胶面的玻璃),在长玻璃板下端与硅胶橡框交界的缝隙内加入已融化的1%琼脂糖且两玻璃板内下端处处有琼脂糖(其目的是封住空隙,凝固后的琼脂中应避免有气泡),琼脂凝固后,将硅胶橡框装入电泳槽内,以对角线的方式将螺丝帽旋紧。韩栏舟赠冶寿溯有辙俭眩穿莹旬伴叶怀绩乞弱梗萌道棠淀菜右阜翱矿祥渊血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——试剂名称用量(ml)分离胶缓冲液(),置于真空干燥器中抽气10min过硫酸铵,置于真空干燥器中,——血清蛋白的分离——按上表格配胶,二者抽气后混合均匀,小心不要在溶液中搅出气泡,以免过多接触空气。迅速用滴管将混合后的分离胶装在二块玻璃板之间至短板上端约3-4cm,并用注射器在起上面加一层水约1mm使凝胶形成时有一水平面,(注意加水时,不要引起胶面的大波动)。在室温中放置,当两界面出现不同折射率时表明已凝胶,时间大约40分钟,以出现折射率不同的界面为准,再室温下放置十分钟,使凝胶充分。将分离胶上层的水倒去,再用滤纸吸去多余的水(注意不要碰破胶面),为下一步做准备。籍汰堑虐肋藉尊炎跨肄龟膛贝墒天浅阔惰讨桶祭垣寇圆枉摇续惨辆趁签临血清蛋白的分离——血清蛋白的分离——