文档介绍：,.,.
论著·
低温冻存时间对肿瘤组织生物大分子的影响
张佳年, 于颖彦, 计骏, 刘卫仁, 吴建林, 陈雪华, 刘炳亚, 朱正纲
上海交通大学医学院附属瑞金医院外科上海消化外科研究所。上海
『商要目的:探讨低温冻存时间对生物大分子、及蛋白质的影响,观察经长期低温冻存的肿瘤样本是否
仍可满足科研的需求。方法:选择上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所肿瘤样本库内至年
间收集的手术切除胃癌标本对包括肿瘤组织及配对正常组织,用于提取组织总蛋白质和核酸,二喹啉甲酸
法测定蛋白浓度,采用凝胶电泳鉴定、完整性。采用逆转录一聚合酶链反应—法检测核转录因
子一亚单位的表达;蛋白印迹法检测—蛋表达。另随机抽取例胃癌标本,
检测其—的单核苷酸多态性位点变异。结果:所有抽提的吸光度比值∞均在.~.间,电
泳条带清晰,可检测出位点变异。与保存~年者相比,储存年或以上的标本与蛋白表达均
有下调.,.。结论:组织样本低温保存在年范围内,其分子的完整性与质量均末受影响;与蛋
白质分子在低温保存~年内尚不影响癌基表达的分析结果,但低温保存年或以上的标本中及蛋白质均有
不同程度降解。
关键词:肿瘤; 标本; 技术方法; 癌基因; 生物大分子; 低温冻存
中图分类号:—文献标识码: 文章编号:———
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组计划的启动,实验研究对高质量肿瘤标本的需求世纪年代后期,创建肿瘤组织库受到许多国
日益增长。而传统的由%甲醛固定、石蜡包埋的组家研究机构的重视,且其流程逐步趋于标准化】,
织样本很难满足研究需求。以往仅根据课题需要组织库开始成为肿瘤基础与临床研究的重要标本
临时收集肿瘤标本,造成众多研究结果互不连贯、来源。我国有条件的大型医疗机构也纷纷启动了
组织标本库的建立。如北京大学临床肿瘤学院通过
基金项目:国家科技部“”重大专项资助;
; 同家自然科学基金项目; 规范化标本库的建立,对临床肿瘤研究起到了推动
:: 上海市浦江人才计划项目作用。上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消
;上海市科委重点基础研究项目
通讯作者:于颖彦—:.. 化外科研究所在教育部“”工程建设经费及上海
诊断学理论与实践年第卷第期
市重点学科建设经费的支持下, 自年起启动三、实验方法
了外科常见肿瘤标本库的建设。—亚单位的蛋白印
累计收集胃肠道肿瘤标本愈千例⋯。而关于组织标迹分析:选用编号~的胃癌标本
本长期冻存对生物大分子的完整性与活性的影响, 应用公司的“—
学术界一直存在争议旧。为阐明这一问题,本研究选”抽提组织总蛋白每组
择我院外科肿瘤组织标本库内冻存时间长短不一的织加入蛋白裂解液,根据法测得蛋
胃癌标本作为研究对象,对课题组正在研究的癌基白浓度,
、及蛋白质位表达,在凝胶图像分析仪上观察蛋