文档介绍：。。,在外加电场作用下向正极泳动。核酸为***分子,,碱基上的氨基解离而磷酸基团中只有第一个磷酸解离,整个分子带正电;pH8左右时,碱基几乎不解离,而磷酸全部解离,整个分子带负电。在碱性环境下,不同的核酸分子由于具有相同的磷酸戊糖结构,几乎具有相同的电荷密度,其电泳行为线性分子在凝胶中的迁移率与其所含碱基对数目的对数值成反比。可以近似用于估算分子的大小。,含水量大(98-99%),可通过调整琼脂糖的浓度改变孔径的大小,起到分子筛的作用。琼脂糖凝胶电泳200bp—50kb(分离范围广、方便)DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的区带。(EB)是一种吖啶类染料,它在紫外灯照射下能发射荧光,当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时,琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分碱基对子中形成荧光络合物,使DNA发射的荧光增强几十倍,电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。EB结构与核酸碱基相似,容易插入DNA中,因而其有强的致癌性。、电泳槽、凝胶紫外透射仪、解剖刀、台式高速离心机、Eppendorf管、移液抢、恒温水浴锅、一次性手套、:根据需要用电泳缓冲液配成不同浓度。本实验配制1%Agrose:1gAgrose、50~×TBE、核酸样品DNAmarkerDL2000电泳缓冲液:本实验选用TBE6×上样缓冲液(Loadingbuffer):4℃贮存。增加样品密度,使样品带颜色,起指示作用。%溴酚蓝、%二甲苯青FF、30%甘油水溶液10mg/ml溴化乙锭(EB):贮存液,棕色瓶室温保存。。操作步骤1、凝胶准备:×TBE配制1%琼脂糖凝胶。①称1g琼脂糖置三角瓶中,×TBE;②微波炉加热大约1分钟,熔化琼脂糖;③熔化的琼脂糖自然冷却到60~70℃时,加入EB(),并轻轻混匀。2、胶床准备:①取出洗净并晒干的胶床和梳子②将梳子垂直插入到胶床的小凹槽内,梳齿底端和床面有1mm的间隙。③将胶床放在调整好的水平台上。大家有疑问的,可以询问和交流可以互相讨论下,但要小声点3、铺胶:将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶床内,凝胶厚度3~5mm。4、室温下静置1小时左右,凝胶固化。将带凝胶的胶床置于电泳槽中,并使样品孔位于电场负极。5、轻轻拔出固定在凝胶中的梳子。原梳齿处(样品孔)即被缓冲液充满,如发现有气泡,应设法去除。