文档介绍：(限制酶)主要从原核生物(用于切割外源DNA,保护自身)中分离纯化出来,识别序列由6个核苷酸(或4、5、8个)组成。末端种类:(1)作用:①作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2)种类:质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。(3)条件:①有一个或多个限制酶切位点②能自我复制③有标记基因(4)一般来说,天然载体往往不能满足人类的所有要求,因此在基因工程中,对某些天然的载体进行人工改造。.,:不需要模板DNA聚合酶::Ⅰ获取目的基因Ⅱ构建表达载体(核心)Ⅲ导入受体细胞Ⅳ目的基因的检测与鉴定.Ⅰ获得目的基因(1)基因组文库(所有的)部分基因文库(部分的),如cDNA文库(2)PCR技术扩增目的基因原理:DNA复制指数方式增加需要:模板DNA,原料(游离的四种脱氧核苷酸),引物, DNA聚合酶(3)人工合成(基因较小)化学合成:DNA合成仪(已知序列)反转录法:未知序列.Ⅱ构建表达载体(核心):目的基因、启动子、终止子、标记基因Ⅲ导入受体细胞(1)植物细胞农杆菌转化法:双子叶植物、裸子植物的体细胞或受精卵基因枪法花粉管通道法(2)动物细胞:显微注射技术受体细胞:受精卵(a含有目的基因表达所需的物质;b具有全能性)(3)微生物细胞:原核生物(繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少)作为受体细胞大肠杆菌:Ca2+处理细胞(感受态细胞)Ⅳ目的基因的检测与鉴定1)检测:DNA分子杂交技术(原理:碱基互补配对)①目的基因作探针②转录出mRNA③翻译成蛋白质:抗原抗体杂交2)鉴定::mRNA形成时切掉了内含子转录的RNA内含子:能转录不能翻译外显子:能转录能翻译真核生物基因编码区:内含子和外显子原核和真核生物的非编码区:对遗传起调控作用(启动子和终止子)①提高农作物的抗逆能力②改良农作物的品质③:Bt毒蛋白基因(我国转基因抗虫棉)、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、:病毒、真菌、细菌等。:赖氨酸含量比对照提高30%:导入生长素基因---提高生长速度导入肠乳糖酶基因---改善畜产品品质生产药物---乳腺生物反应器或乳房生物反应器优点:易提取、产量高、质量好、成本低转基因动物作器官移植的供体优点:抑制抗原基因的表达、或除去抗原决定的基因、---重组人胰岛素细胞因子、抗体、疫苗、激素等。我国生产:白细胞介素-2、干扰素(糖蛋白,为我国第一个批量生产的药物)、:,克服了两个物种间由于生殖隔离不能进行基因交流的障碍,能定向培育生物新品种。:1)有性生殖时:非等位基因的重新组合2)DNA的拼接技术---:、:无性生殖脱分化再分化外植体固体培养基营养:蔗糖、矿质元素(无机盐)激素:生长素、细胞分裂素(也有赤霉素)注:愈伤组织之后需要给予光照条件原理:植物细胞的全能性去除细胞壁的方法:酶解法(纤维素酶和果胶酶)诱导原生质体融合的方法:物理法:离心、振动和电激化学法:聚乙二醇(PEG)生长素含量>细胞分裂素:诱导脱分化和根原基形成生长素含量<细胞分裂素:诱导再分化和芽原基形成一、:生成新的细胞壁植物体细胞杂交的原理:细胞膜的流动性、植物细胞的全能性意义:克服不同物种远缘杂交的障碍3植物细胞工程的应用(1)微型繁殖意义:保持亲本优良性状、快速繁殖(2)作物脱毒取材部位:茎尖、根尖(分生区)(3)人工种子:由胚状体和人工种皮(营养物质、杀菌剂)(4)单倍体育种(5)细胞产物的工厂化生产例如:从愈伤组织中提取紫草素.