文档介绍：烟草叶片愈伤组织诱导与植株再生 2001级生物技术 2班刘莹 200113831 摘要:在植物组织培养中,主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生,使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过脱分化形成愈伤组织,并由愈伤组织再分化形成植物体。本实验通过烟草叶片外植体体外培养,诱导愈伤组织,并分化培养产生再生植株。 Abstract:Intheplanttissueculture,themaintargetistoinducethecallus formingandmorphogenesis,thusmakesacell,aninvitro formingthe microsporesbydedifferentiation, thenaplant byredifferentiation. Inthisexperimentweusetheexplantculturedinvitrotogeneratethecallus and to be regenerated the plant by differentiation. 关键词:全能性;组织培养;愈伤组织;分化培养;无菌操作 1前言: 细胞是生物体的基本结构单位和功能单位。细胞工程就是利用细胞的全能性,通过类似于工程学的步骤,在细胞整体水平或细胞器水平上,按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或特种细胞产品的一门综合性科学技术[1]。细胞工程所涉及的基本内容,包括细胞培养、细胞融合、细胞核移植、染色体添加、细胞器转移、胚胎分割、动植物克隆等一系列技术[2]。在植物学界,早在1902年德国的植物学家哈泊兰德就预言植物细胞的全能性。1934年荷兰的植物学家温特发现生长素,并证实了对植物细胞培养的作用。1937年,在法国巴黎的 Gautheret实验室、格勒诺布尔的Nobecourt实验室和普林斯顿的White实验室等几个实验室几乎同时获得植物培养物的愈伤组织并长期培养成功[3]。这是植物细胞与组织的首次成功。 1960年,英国诺丁汉大学科金教授创造性地应用酶解的方法,首次成功地从番茄幼苗的根部制备到大量的原生质体。在此基础上,1972年美国的卡尔森等人用NaNO 3作为融合诱导剂, 将来自不同种的两个烟草原生质体进行融合,获得了世界上第一个体细胞杂种植株。[1] 细胞工程技术给医学、农牧业带来巨大的变革。诸如组织培养等生物技术只需小量投资就可开发,但却能给农民带来实在的利益。[4] 植物细胞和组织培养的技术性强,要求无菌操作,通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术,加深对无菌操作的了解,掌握植物愈伤组织诱导培养技术和调控条件,了解器官分化和植株再生的过程。 2材料与方法: 材料:烟草无菌苗、烟草叶片愈伤组织方法: 2. 1培养基制备一般矿质盐浓度较高的基本培养基如 MS,B 5及其改良培养基均可用于诱导愈伤组织[5]。本实验用的是 MS培养基,它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高,广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养,效果良好。 2. 1. 1每个组配 2000 ml的培养基: 向锅中依次加入培养基母液: 大量元素