文档介绍：目录
摘要
目录
第一章绪论……………………………………………….(1)
引言………………………………………………………..(1)
…………………………….(1)
第二章青霉素结合蛋白测定技术的研究…………………(4)
……………………………………………….(5)
……………………………………………….(6)
致谢
参考文献
摘要
当前,细菌耐药性问题日趋严重,给临床治疗带来困难,对卜内酞胺类抗生素而言,某些菌青霉素结合蛋白(PBps)改变造成的耐药性,是卜内酞胺类抗生素的特点。一般细菌的PBPs均为胞浆膜上的蛋白质,是细菌致死的靶位。它的数目、位置、亲和力的变化造成与卜内酞胺类抗生素不易结合而产生耐药性。人们常采用SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳和放射自显影的方法研究PBPs图谱,以便了解敏感菌和耐药菌的区别。所以,PBPs测定技术是研究压内酸胺类耐药性的重要手段[l]。的穿透力弱,用一般放射自显影法不能获得PBPs图谱,需采用荧光闪烁剂增效的“荧光放射自显影法者更少,本文介绍这一技术。
关键词:青霉素结合蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳荧光放射自显影
绪论
青霉素结合蛋白(PBPs)是广泛存在于细菌表面的一种膜蛋白,是β_内酞胺类抗生素的主要作用靶位。每个菌种都有一套特异的PBPs,称PBPs谱。在一种菌种中PBPs按分子量大小排序,分别称PBPI,PBP2,PBP3......。PBPl为分子量最大的一种。不同菌属PBPs的生理功能很相近,而且分子结构上也有其相关及相似性。PBPs含量很少,仅占细胞膜蛋白总量的1%,不同PBP含量变化很大,如大肠杆菌中高分子的PBPI,PBP2和PBP3量很少,而低分子PBPS和PBP6却占PBPs量的70%—90%。各种PBP与抗生素亲和力相差亦很大。亲和力大小一般用。表示; 指使-青霉素G结合减少50%时该抗生素浓度,其值越高,示药物亲和力越小
不同细菌其种类及含量均不相同。但各种菌种的PBPs又有许多类似的结构与功能,在细菌生长、繁殖中发挥重要作用。PBPs结构与数量的改变是产生细菌耐药的一个重要机制。
60年代,细菌细胞壁的结构被阐明,为人们认识青霉素作用机制及PBPs奠定了基础。1972年Suginak . Blumberg和Stro minge:发现青霉素结合蛋白,用放射性同位素标记的青霉素可以标出细菌表面的PBPs,但后来的研究发现并非所有PBP均是青霉素作用的致命靶位。所有细菌都含有多种青霉素结合蛋白,不同菌属其PBPs含量、种类各不相同,不同的抗生素通过与不同的PBP蛋白结合而产生不同的抗菌活性。现今,各类抗生素虽种类繁多,但在耐药菌的治疗中仍缺乏有效手段。因此近年来围绕PBPs开展了大量的研究工作,试图从分子结构与基因水平认识PBPs,探求细菌耐药的机制,企图获得更有效的治疗手段。
PBPs在不同菌种中各不相同,但对其分子结构,生理功能的研究发现每种菌种均有特异PBPs,PBPs的生理功能直接影响与其结合的抗生素的抗菌活性,,为了研究者能迅速了解这方面研究进展,以下以大肠杆菌和肺炎球菌为例说明研究近况。
对大肠杆菌PBPs的研究最早开展,也是研究最多的,比较具有代表性。大肠杆菌含6种PBP,依次为PBPI,PBP2,,PBPS,PBP6。
大肠杆菌PBP1主要功能为维持细胞形态,可分成PBP1a,PBPlbs两部分。。是细菌生长的重要蛋白,,PBP1b是一种球蛋白,具有2个密切相关的酶活性区,一为转肚酶活性区(转肚反应是细胞壁合成中的限速反应),另一为转糖酶活性区。 PBPla具有PBPlbs替代酶的作用。缺乏PBPla的变异株能够存活,,PBPlbs基因或特异性分裂基因ftsA, ftsQ,pbpB, ftsZ变异的细菌株来研究PBPa与PBP1 bs的功能时发现:PBPla不能独立维持细胞完整性,需与PBP2, bs显然较PBPla有更强的生物合成功能,在缺乏PBP
1a,PBP2,PBP3和f tsQ基因产物时变异株细菌仍能存活,在细菌分裂中,PBPlbs也起着相当作用,与肤聚糖的合成有关。
PBP2能维持大肠杆菌的张力,