文档介绍：DNeasyBlood&TissueKit(Qiagen,Hilden,Germany)试剂盒中文操作说明书作者:Allanflying(站内联系TA)  发布:2012-09-®Blood&:注意:1)    石蜡包埋组织的DNA一般小于650bp,还要视样本类型与保存年限而定。2)    固定剂一般为福尔马林或酒精。不推荐用蛾酸固定的样本。3)    溶解时间随样本类型和溶解状态而定。4)    产量视样本类型和保存年限而定。推荐用50-100ul的AE缓冲液洗脱纯化的DNA。5)    开始前要预热孵化器或水浴锅至37℃,用于操作步骤9)。:1)    将小片石蜡包埋的组织(小于25mg)放入2ml离心管中(自备)。2)    加入1200ul的二甲苯,用力涡旋震荡。3)    最大转速室温(15-25°)离心5分钟。4)    移液枪吸去上清。小心不要吸去沉淀。5)    往沉淀中加1200ul的(96-100%)酒精(目的是洗去剩余二甲苯),轻柔地震荡。6)    最大转速室温(15-25°)离心5分钟。7)    移液枪吸去上清。小心不要吸去沉淀。8)    重复一次步骤5-7。9)    37°孵育10-15分钟,孵育过程打开离心管盖,直到酒精蒸发干净。10)    加入180ul的ATL缓冲液,继续提取组织总DNA中的步骤2。:1)    用PBS润洗组织样本(小于25mg)两次(目的是去除固定剂)。2)    去PBS,:1)    ATL缓冲液和AL缓冲液可能存储后沉淀,如果沉淀,在56°孵育直至沉淀溶解。2)    在AW1缓冲液和AW2缓冲液中加入一定量(见瓶身)的(96%-100%)酒精,然后才使用。3)    打开水浴锅至56℃,用于步骤2。4)    如果是冻存的样本,拿出来室温预热,避免反复冻融。操作步骤:1)    取25mg组织,切成小块,。加入180ul的BufferATL。2)    加入20ul的蛋白酶K。涡旋震荡(5-10S)。56℃孵育直至组织消化完全,一般为1-3小时。偶尔间断的拿出震荡。3)    涡旋震荡15S,加入200ul的BufferAL,涡旋充分混匀。加入200ul的(96%-100%)的酒精。涡旋充分混匀。(注:样多时可将AL和酒精预混以节省时间)4)    转移步骤3中的所有混合液至DNeasyMinispin离心柱,柱子放在2ml的收集管上(已提供),≧6000g(8000rpm)离心1分钟。弃收集管/液。5)    将离心柱放在一个新的2ml收集管上(已提供)加500ul缓冲液AW1,≧6000g(8000rpm)离心1分钟。弃收集管/液。6)    将离心柱放在一个新的2ml收集管上(已提供)。加500ul缓冲液AW2,20000g(14000rpm)离心3分钟。弃收集管/