文档介绍：医学生物化学实验-教案《医学生物化学实验》教案第1次课2学时实验项目3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定还原糖实验性质设计性实验教学目的和要求1、了解糖的还原性2、掌握还原糖定量测定的原理和方法。3、熟悉分光光度计的使用方法。教学重点与难点重点:绘制标准曲线的方法,分光光度计的使用原理和使用方法。难点:标准曲线的应用。(1)1mg/mL葡萄糖标准溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100mL,。(2)3,5-二硝基水杨酸试剂:,5-二硝基水杨酸并量取262mL2mol/LNaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中(182g酒石酸钾纳溶于500mL水中),再加5g结晶酚和5g亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解,冷却后定容到1000mL贮于棕色瓶中。(3)未知浓度还原糖。材料小麦淀粉或玉米淀粉。器材分光光度计,天平,水浴锅,电炉,试管若干等。实验内容一、实验原理★:在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。黄色桔红色二、实验步骤:,按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂,配成不同浓度的葡萄糖反应液。表1葡萄糖标准曲线制作管号1mg/ml葡萄糖标准液(mL)蒸馏水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD-540nm)(未知浓度还原糖),在沸水浴中准确加热5min取出,冷却至室温,用蒸馏水补足至5mL,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色。调波长540nm,用1号管调零点,分别测出2~6号管的光密度值。▲以光密度值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,在坐标纸上绘出标准曲线(电脑Excel完成最好)。计算7号管还原糖的百分含量。三、结果与计算▲:计算出7号管光密度值的平均值,在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数,按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。 查曲线所得葡萄糖毫克数×提取液总体积/测定时取用体积还原糖(%)=——————————————————————————×100% 样品毫克数教学过程中师生活动设计糖的还原性,具有还原性的糖结构有何特点?提纲、板书设计实验原理及反应方程式,实验步骤中表1及计算公式作业为什么要设置空白对照?标准曲线的定义?主要参考资料[1]《生物化学实验》,何幼鸾、汤文浩,华师出版社,2013[2]《生物化学实验》,董晓燕主编,化学工业出版社,2010总结分析让学生理解糖定量测定的原理及方法;强调标准曲线的绘制要点;需要和学生一起推导还原糖浓度的公式《医学生物化学实验》:颜色反应鉴别糖的方法难点:鉴别糖的反应原理实验材料1、仪器:试管及试管架、滴管、移液管及恒温水浴锅2、试剂:莫氏试剂、塞氏试剂、托伦试剂;1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、1%果糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液实验内容一、实验原理★:α—萘酚反应:糖在浓无机盐作用下,脱水生成糠醛衍生物,后者在浓硫酸的作用下能与α—萘酚生成紫红色物质,在糖液面与浓硫酸液面间出现紫色环。但一些非糖物质对此反应也呈阳性间苯二酚反应:在酸作用下,***糖脱水生成羟***醛,后者可与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是***糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应慢。托伦反应:戊糖在浓酸作用下脱水生成糠醛,后者可与间***结合生成樱桃红色物质。本反应常用来鉴定戊糖,戊糖此反应最快,可以和其他糖类区分。二、操作步骤▲:α—萘酚反应:先取3支试管,分别加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液,然后向3支试管中各加入2滴莫氏试剂,混匀。另外取1支试管,只加2滴莫氏试剂作为空白对照,倾斜4支试管,,慢慢立起试管,切勿摇动。试管中液体分成两层,浓硫酸在试液下面。在两液分界处有紫红色环出现。观察、记录各管颜色。间苯二酚反应:取3支试管,分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%。,混匀。将3支试管同时置于沸水浴中,注意观察颜色的变化及变化时间。托伦反应:取3支试管,分别