小鼠肝细胞原代培养.ppt

文档介绍：小鼠肝细胞原代培养-:脱颈处死小鼠,浸入75%酒精中1min,沥干。:剪开腹部皮肤,撕开皮肤,,打开腹腔,取出肝脏。,剪取一块蚕豆大小的肝组织。:把肝组织剪成1~2mm3小块,用无血清培养液淋洗2~3次。:将肝组织块移入小瓶中,加8ml混合消化液,37℃、40min,每隔5~10min顺时针摇匀。:消化液过100目筛网,收集滤液,移入离心管。:离心800rpm,5min,吸弃上清液。:用无血清培养液离心洗涤1次。:用RPIM1640培养液(含10%胎牛血清)重悬浮肝细胞,(取样计数)。:将细胞接种于培养瓶中,密度为106/ml (2×105/cm2), 37℃、5%CO2培养。注意事项根据组织类型选择适当的消化液。控制消化时间,尽量减少细胞损伤。尽快促进细胞贴壁,必要使用生长基质涂抹瓶壁,或先少量细胞悬液接种,培养3~5h后,补足培养液。适当提高细胞接种密度。