文档介绍：实验一培养基的配制一、实验目的掌握MS培养基母液及MS培养基的配制与灭菌方法,并为后续实验配制培养基。二、、实验分组分4组:1、MS培养基母液的配制:每组各配一种母液。2、MS基本培养基的配制与灭菌:1+2组、3+4组各配500ml。四、实验用品1、仪器与器皿:天平、高压灭菌锅、电炉;药匙、称量纸、烧杯、量筒、玻棒、试剂瓶(500、1000ml)、pH计与pH试纸(4~8)、三角瓶(100ml,70个)、封口膜、记号笔等。2、试剂与药品:见表1。3、激素母液:6-,。)4、。五、(称量见表1)大量元素母液(10倍液)。分别称取10倍用量的各种大量无机盐,溶解于大约600ml略加热的蒸馏水中(注意:前3种成分可在一起溶解,KH2PO4和CaCl2·2H20须单独溶解后再混合),冷却后定容至1000ml,装入试剂瓶中。(100倍液),一般10-7~10-5M。分别称取100倍用量的微量无机盐,溶解于500~800ml蒸馏水中,定容至1000ml,装入试剂瓶中。(100倍液)分别称取50倍用量的Na2-EDTA·2H2O(乙二***四乙酸二钠)和FeSO4·7H2O,各自加热(约50℃)溶解于约200ml蒸馏水中,混合、冷却、定容至500ml(75~80℃螯合1h),装入棕色试剂瓶中,用力振荡1~2min,以防沉淀。(100倍液)分别称取50倍用量的各种有机物质,溶解于400ml蒸馏水中,定容到500ml,装入棕色试剂瓶中。注意:所有母液均需标明名称、浓缩倍数和配制日期,储存在4℃冰箱,一般可存放3周左右。如果沉淀或长菌,原则上丢弃。(用于实验2无菌苗的培养,1+2组、3+4组各配500ml)1)取1000ml烧杯一只,加入蒸馏水400ml,然后加入大量元素10倍母液50ml,微量元素、铁盐、有机物质100倍母液各5ml,蔗糖15g,用磁力搅拌器使其完全溶解。2)(,用NaOH调),加蒸馏水定容至500ml。3),在电炉上加热溶解。4)将溶解好的培养基分装到100ml三角瓶中,每瓶装30~35ml,用封口膜封口,进行高压高温蒸气灭菌。5)灭菌方法:将分装好培养基的三角瓶放入金属框中,装入已加入适量蒸馏水的灭菌锅内;盖好锅盖,打开放汽阀,关闭安全阀,接通电源;待水烧开排净冷空气后,关闭放汽阀,使温度升至121℃()并持续15~20min;切断电源,待压力表指针回零时,打开放汽阀排出剩余蒸汽,开锅取物。注意:锅内加水不足易造成干烧而损坏灭菌锅;锅内残存冷空气会使升温减慢甚至达不到预期温度;灭菌温度过高会使糖类焦化,可能有毒;灭菌时间过长会使有机物分解、盐沉淀、培养基难凝固;过早开阀会使培养基外溢。6)在三角瓶壁上标好培养基名称、小组名和日期,存放于阴凉洁净处。3、愈伤组