文档介绍：obestatin 对大鼠胰腺外分泌调节作用的实验研究- 1 - 摘摘摘摘要要要要 Obestatin( 肥胖抑制素) 是最近从大鼠胃组织中发现的一种新的脑肠肽。它是一种 ghrelin 相关肽, 与 ghrelin 来自同一基因。 obestatin 与 ghrelin 在调节摄食、胃肠生理等方面作用完全相反, 被认为是一对“阴阳”肽。 ghrelin 也称为食欲刺激素, 是一种由 23 个氨基酸组成的脑肠肽, 生长激素促分泌素受体( gro wth hormone secretagogue receptor , GHSR )为其受体, ghrelin 对胰腺外分泌也具有重要的调节作用, 主要表现为促进胰腺外分泌, 其机制是通过迷走- 迷走神经通路发挥作用的。虽然 obestatin 和 ghrelin 来源于同一前体 proghrelin , 但 obestatin 自发现以来就充满了各种争议, 2005 年, Zhang 等首先在胃黏膜中发现并命名了 obestatin , 在最初的功能研究中, 腹腔和侧脑室注射人源性 obes tatin 可以抑制大鼠的食欲,减少体重,进一步的研究发现: obestatin 可以抑制渴感和焦虑、提高大鼠的记忆力、抑制前脂肪细胞的增长、控制机体的水代谢。在人体的研究当中, 部分研究者发现在肥胖人群里, 胃黏膜中 obestatin 表达量和血循环中 obestatin 含量均出现减少,因此他们推测 obestatin 在调节机体能量代谢方面发挥了重要作用, 是 ghrelin 的拮抗剂。尽管有以上证据证明 ob estatin 存在生物学作用,但绝大多数研究应用了大剂量范围的 obestatin 、不同的实验方法、不同的动物及不同来源的 obestatin 并未得出相同结论, 因此有研究者提出应该重新命名 obestatin 。除了对 obestatin 生物学功能方面存在疑问外, 对其受体也存在着争论: 其发现者首次报道了 G 蛋白偶联受体 39 ( GPR39 ) 是 obestatin 的天然受体,结合实验也证明 GPR39 广泛存在于中枢神经系统、外周重要器官, 而以胃肠道的含量最高。后来的三个实验室并未证明 GPR39 为 obes tatin 的固有受体, 因此对发现者的研究提出了质疑, 对于以上质疑, 2007 年 Zh ang 重复了自己的实验并得出他们实验室不能证明 GPR39 是 obestatin 受体的结论。因此对 obestatin 的研究还存在以下疑问: (1) 在 obestatin 本身方面: 在体内这种分子是否真正存在? 如果存在到底有怎样的生理功能功能? 是否能拮抗 gh relin 的生理作用? 它是否受到中枢及其他激素的调控?(2) 在外源性分子方面: 人工合成的外源性 obestatin 多肽分子是否具有与内源性分子相同的空间结构及生物活性? (3) 在 obestatin 受体方面: obestatin 是否通过 GPR39 受体发挥作用?是否还有别的作用途径?(4) 在研究方法方面: 利用人工合成的 obestatin 抗体, 检测到的仅仅是 obestatin , 还是包括了无实际作用的 preproghrelin 或 pro ghrelin ? 胰腺的外分泌功能受到中枢神经和肠神经以及大量的激素和脑肠肽组成的复杂网络的调节, 业已证实: 胆囊收缩素( CCK ) 、促胰液素、胰多肽、 ghrelin 、第二军医大学博士学位论文- 2 - 血管活性多肽、蛙皮素和胃动素等激素可以刺激胰腺的外分泌;而生长抑素、胰高糖素、降钙素、肾上腺素和去甲肾上腺素等可以抑制胰腺的外分泌,由于对 obestatin 功能及受体研究存在着大量的争论,并且 obestatin 对胰腺外分泌功能的调节作用目前还不清楚。本研究拟采用大鼠离体腺泡、小叶及在体胰腺外分泌功能研究模型, 应用分离大鼠离体腺泡细胞和胰腺小叶、静脉持续注射、侧脑室内微量注射等技术明确 obestatin 对胰腺外分泌功能的调节作用及其机制, 并观察 obestatin 及其它脑肠肽对大鼠胰腺外分泌调节的交互作用, 用胆囊收缩素作为阳性对照, 从而进一步完善胰腺外分泌调节的机制和 obestatin 的生物学功能。第一部分第一部分第一部分第一部分一种改良的胰腺腺泡提取方法一种改良的胰腺腺泡提取方法一种改良的胰腺腺泡提取方法一种改良的胰腺腺泡提取方法目的: 对经典的 Williams 提取胰腺腺泡方法进行改良,以期探索一种简便, 经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法。方法: 雄性 SD 大鼠,鼠龄 8-10w ,体重 200-250g 。在无菌条件下,以 3% 戊巴比妥钠,按照 15mg/kg 剂量