文档介绍：南华大学
硕士学位论文
应用肿瘤转移基因芯片筛选小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ转移相关基
因
姓名:彭芳
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:朱建思
20070501
原创性声明
本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作
及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方
外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获
得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的
同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。
作者签名: 日期: 年月日
关于学位论文使用授权说明
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保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的
全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;学校
可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。
作者签名: 导师签名: 日期: 年月日
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应用功能分类基因芯片筛选
小鼠组织细胞肉瘤 L-Ⅱ转移相关基因
研究生:彭芳
导师: 朱建思教授
中文摘要
目的:采用基因芯片技术比较筛选前的小鼠组织细胞肉瘤 L-Ⅱ与筛选后的具有
高转移能力的第 9 代转移瘤细胞之间的基因表达谱,利用生物信息学方法筛选
出与淋巴瘤侵袭和转移相关的差异基因。
方法:L-Ⅱ瘤细胞接种小鼠胁部皮下,取其肺转移灶制成细胞悬液接种另一小鼠
体内,再取其肺转移灶继续传代。对筛选前的 L-Ⅱ瘤株和筛选后的第 9 代瘤株
的细胞形态、生存时间、肿瘤生长曲线、免疫组化的差异进行了比较。再分别
提取筛选前后瘤细胞的 mRNA,通过逆转录将细胞 cDNA 进行生物素标记,用
美国 Superarray 公司的含 113 个目的基因的肿瘤转移基因芯片杂交, GEArray 软
件对结果进行分析,筛选出传代前后表达有差异的基因。对部分有差异表达的
基因用 RT-PCR 和 Western blot 进行分析鉴定。
结果:用体内转移灶连续传代法筛选小鼠组织细胞肉瘤 L-Ⅱ至第 9 代。形态学
观察: 光镜下筛选前后瘤细胞形态结构基本一致,细胞呈弥漫分布,细胞圆形至
多边形,大小不等,核圆形、梭形或不规则形,嗜碱性增强,核浆比例增大,
核分裂像较多,可见病理性核分裂像。生物学特性观察:小鼠荷瘤生存时间显
示筛选前的 L-Ⅱ瘤株为 ± 天,筛选后的第 9 代瘤株为 ± 天,P
﹤,两者差别有显著性。肿瘤生长曲线:结果显示筛选后的第 9 代瘤株生长
速度快于筛选前的瘤株。免疫组化:筛选后的第 9 代瘤株 IGF-1、MMP-10 表达
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均较筛选前的 L-Ⅱ瘤株增强。用肿瘤转移基因芯片杂交筛选出传代前后 L-Ⅱ瘤
细胞的差异表达基因共 21 个,涉及肿瘤转移发生发展的各个方面,其中上调基
因 17 个,下调基因 4 个。其中:细胞黏附相关基因 2 个、基质金属蛋白酶 2 个、
调节细胞周期基因 3 个、细胞生长与增殖基因 5 个、凋亡相关基因 1 个、转录
调控基因 2 个、其他 6 个。选择其中有代表意义的 4 个基因利用 RT-PCR 和 Western
blot 进行验证,结果证实所选基因在筛选前后瘤细胞中均有差异表达,与基因芯
片的表达情况一致,说明基因芯片结果可信度较高。
结论:
1 成功筛选出 L-Ⅱ高侵袭转移瘤株,筛选后的第 9 代瘤株具有更强的侵袭转移
能力。
2 小鼠组织细胞肉瘤 L-Ⅱ的侵袭转移是一个涉及 Kras-2、IGF-1、MMP-10、
MMP-13、Brms-1 等重要转移基因和其他相关基因等多个基因共同参与的复杂过
程。
关键词: 基因芯片;恶性淋巴瘤;转移;差异表达基因
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Identification of metastasis-associated genes in mice
a L-Ⅱ using cDNA microarray of tumor
metastasis-associated genes
Abstract
Objective:To analyze the differences in gene expression between mice
a L-Ⅱof parent and offspring cell lines using mi