文档介绍：第8章抗体制药第一节概述第二节单抗及其改造第三节抗体工程第四节抗体药物第五节疫苗第一节概述 1、1890 年 Behring 和北里柴三郎等人发现白喉抗毒素血清, 并建立了血清疗法, 开抗体制药之先河。因为是被动免疫,虽然治疗效果很好,但不持久。. 2、1937 年 Tiselius 等人用电泳法将血清分为白蛋白、甲种(α)球蛋白、乙种( β)球蛋白、丙种( γ)球蛋白,并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。抗体指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。它是机体免疫系统受抗原物质刺激后, B淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细胞,由浆细胞合成和分泌的球蛋白。病人血清中具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白, 称为免疫球蛋白( Immunoglobulin, Ig )。 Ig是化学结构的概念,而抗体是生物学功能的概念,所有抗体是 Ig,但并非所有 Ig分子都有抗体活性。 3 、1960 年发现多发性骨髓瘤细胞有多种免疫球蛋白。由于病原微生物是含有多种抗原决定族的抗原物质,因此制的这些抗体制剂也是多种抗体的混合物,故称为多克隆抗体。易出现非特异性交叉反应。 4、1975 年K?hler and Milstein 等首次利用 B淋巴细胞杂交瘤技术制备出 McAb. 在临床上主要用于诊断和治疗。 McAb 由一个 B细胞克隆产生的,只能识别某一个抗原表位的高度特异性抗体。 McAb 在免疫导向疗法中存在的困难(障碍): A、 McAb 均是鼠源性抗体,应用于人体内可产生人抗鼠抗体( HAMA ),加速了排斥反应,在人体内的半衰期只有 5~6h ,难以维持有效药物作用靶组织时间; B、完整的抗体分子的相对分子质量过大,难以穿透实体肿瘤组织,达不到有效的治疗浓度。解决问题的方法或途径—基因工程技术 A、降低 McAb 的免疫源性; B、降低 McAb 的相对分子质量。 5、 1984 年报道了人—鼠嵌合抗体, 之后制备出了改型抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等多种类型,基本上消除了抗体的鼠源性(免疫源性),相对分子质量只有完整抗体分子的 1/80~1/3 。 6、 1994 年 Winter 创建了噬菌体抗体库技术,以基因工程方法制备抗体并发展成抗体工程。它是抗体研究领域的一次技术革命,它不用人工免疫动物和细胞融合技术,完全用基因工程技术制备人源性抗体。第二节单克隆抗体及其改造(Monoclonal Antibody ) 一、制备单克隆抗体的一般流程 McAb 是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。由于这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体,又是单一的 B淋巴细胞克隆产生的,故称为单克隆抗体。 1、抗原与动物免疫免疫方法:体内免疫和体外免疫抗原:颗粒性抗原和可溶性抗原免疫动物: BALB/c 小鼠和 Lou 大鼠 2、细胞融合与杂交瘤细胞的选择培养基本方法:取适量脾细胞( 1×10 8)与骨髓瘤细胞(2×10 7 ~3×10 7)进行混合,在 PEG 作用下诱导它们融合,时间控制在 2min 以内,然后用培养液将 PEG 融合液缓慢稀释。