文档介绍：掌握免疫组化技术的概念、原理、优点、 ABC 染色的基本操作,了解免疫组化染色技术的其他几种方法及临床应用。学****重点主要讲述的内容§概述 l免疫组化的概念和优点。 l免疫组化染色前的准备。 l抗体的标记 l如何降低非特异性染色。§免疫组织化学方法§免疫组化结果的判定以及染好切片的关键§免疫组织化学的应用。§免疫酶组织化学染***片举例。 免疫组织化学又称免疫细胞化学,其主要原理是用荧光素、生物素或***等标记的抗体(或抗原)对细胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定量检测,经过组织化学的呈色反应之后,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。凡是能作抗原、半抗原的物质,如蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受体及病原体等都可应用相应的特异性抗体,将其用免疫细胞化学手段检出,并研究。 免疫组织化学又称免疫细胞化学,其主要原理是用 免疫组织化学又称免疫细胞化学,其主要原理是用荧光素、生物素或***等标记的抗体(或抗原)对细荧光素、生物素或***等标记的抗体(或抗原)对细胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定量检测,经过组织化学的呈色反应之后,用显微镜、荧量检测,经过组织化学的呈色反应之后,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。凡是能作抗原、半抗原的光显微镜或电子显微镜观察。凡是能作抗原、半抗原的物质,如蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、物质,如蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受体及病原体等都可应用相应的特异性抗体,将其用免受体及病原体等都可应用相应的特异性抗体,将其用免疫细胞化学手段检出,并研究。疫细胞化学手段检出,并研究。概念 1. 高度的特异性 抗原抗体反应是特异性最强的反应之一,免疫细胞化学所用的抗体必须是特异性强的多价或单价抗体, 具有高度的认别能力,在抗原识别上可达到单个氨基酸的水平,这是其它组织化学方法难以相比的。 1. 1. 高度的特异性高度的特异性 抗原抗体反应是特异性最强的反应之一,免疫细 抗原抗体反应是特异性最强的反应之一,免疫细胞化学所用的抗体必须是特异性强的多价或单价抗体, 胞化学所用的抗体必须是特异性强的多价或单价抗体, 具有高度的认别能力,在抗原识别上可达到单个氨基具有高度的认别能力,在抗原识别上可达到单个氨基酸的水平,这是其它组织化学方法难以相比的。酸的水平,这是其它组织化学方法难以相比的。免疫细胞化学的突出优点是: 免疫细胞化学的突出优点是: 2. 敏感性高 现代免疫细胞化学采用各种有效方法最大限度保存细胞和组织内待检物质的抗原性,采用各种增敏方法,使用高度敏感的和高亲和力的抗体,保证可检出细胞内超微量的抗原分子,用显微镜和电子显微镜观察结果,因此,它是在细胞、分子水平或基因水平的检测技术。 2. 2. 敏感性高敏感性高 现代免疫细胞化学采用各种有效方法最大限度 现代免疫细胞化学采用各种有效方法最大限度保存细胞和组织内待检物质的抗原性,采用各种增保存细胞和组织内待检物质的抗原性,采用各种增敏方法,使用高度敏感的和高亲和力的抗体,保证敏方法,使用高度敏感的和高亲和力的抗体,保证可检出细胞内超微量的抗原分子,用显微镜和电子可检出细胞内超微量的抗原分子,用显微镜和电子显微镜观察结果,因此,它是在细胞、分子水平或显微镜观察结果,因此,它是在细胞、分子水平或基因水平的检测技术。基因水平的检测技术。 3. 方法步骤统一 若掌握一种技术操作方法步骤,则一通百通。 4. 形态、机能和代谢密切结合 是一种集定性、定位和定量密切结合;形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。 3. 3. 方法步骤统一方法步骤统一 若掌握一种技术操作方法步骤,则一通百通。 若掌握一种技术操作方法步骤,则一通百通。 4. 4. 形态、机能和代谢密切结合形态、机能和代谢密切结合 是一种集定性、定位和定量密切结合;形态、 是一种集定性、定位和定量密切结合;形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。抗原修复常规石蜡切片的标本一般均采用甲醛固定,甲醛固定的部分组织细胞免疫组化的敏感性明显降低,主要原因为甲醛固定过程中形成的醛键以及甲醛固定导致的蛋白与蛋白之间的交联,均会封闭部分抗原决定簇,同时甲醛的这种交联作用会影响细胞膜的通透性, 使抗体分子难于渗入细胞内,从而影响染色效果。?化学方法(酶消化方法) 胰蛋白酶( trypsin )消化方法酶浓度一般为 %~%, 胃蛋白酶(pepsin 〉消化方法 % 胃蛋白酶链霉蛋白酶( poruse )消化方法浓度为 % 。?物理方法单纯加热方法;高压加热方法;微波方法微波方法§将切片常规脱