文档介绍：菌种传代和保育 1 目的规范试验用菌种的管理制度,保证菌种正常保存和传代。 2 范围适用于广州中大医疗器械有限公司质管部使用的菌种。 3 责任质检部主管、经理、质检员。 4 相关文件或表单菌种使用记录菌种卡片菌种检查记录菌种确认试验记录 5 定义工作菌种:应用于日常实验中的菌种,如培养基灵敏度检查、验证实验等。传代菌种:只用于菌种的接种和传代、保存的菌种。 6 菌种的管理菌种的购买和接收可选购买方:广东省微生物菌种保藏中心、广东环凯微生物科技有限公司。购买的原始菌种管就是玻璃安瓿装的冻干菌, 接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料, 包括菌种名称、编号等。接收菌种时应检查安瓿的完整性。在相应的菌种接收记录上记上关于菌种的所有信息,如名称、数量和接收日期等。在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签,标明菌种名称、编号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、效期。菌种的编号将菌种接种至一新鲜培养基上,每萌发一次即称为一代,因此,当原始菌种复温并转至新培养基内生长,即认为已传代一次。从菌种保藏中心获得的冻干菌菌种为第 0 代,冻干菌菌种开启转种后为第 1代。每次接种传代, 每支保存菌种需标明菌名、统一编号、传代次数、接种日期、有效期。购进菌种若购进时有编号,延用原编号,于原编号前加菌种名称前两位汉字;若无,用购进日期代替(例: 2012 年4月9日购进无编号的大肠杆菌菌种,自编号为: 大肠 120409 )。传代编号包括原菌种号-传代支数顺序号,每传一代,在原先的菌种编号增加一个传代号,菌种分为传代菌种和工作菌种。每次接种传代一般 6 支,传代菌种 1 支,为编号 1 ;工作菌种 5 支, 如用量较大的菌种,可适量增加其传代的数量。菌种选用金黄色葡萄球菌( us aureus ) [(B)26003] 大肠埃希菌( Escherichia coli ) [(B)44102] 白色念珠菌( Candida albicans ) [(F)98001] 黑曲霉( Aspergillus niger ) [(F)98003] 铜绿假单胞菌( Pseudomonas aeruginosa ) [(B)10104] 生孢梭菌( Clostridium sporogenes ) [(B)64941] 菌种保藏方法保藏方法大致可分为以下几种: 传代培养保藏法有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用) ,培养后于 4—6℃冰箱内保存。液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。冷冻保藏法可分低温冰箱( -20 —-30 ℃, -50 —-80 ℃) 、干冰酒精快速冻结(约-70 ℃)和液氮( -196 ℃)等保藏法。冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度( -70 ℃左右) 下快速冷冻, 然后在减压下利用升华现象除去水分( 真空干燥)。备注: 有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法