文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
HRE增强HSV-TK/GCV对乏氧环境Ewing肉瘤细胞杀伤作用的研究
姓名:司英健
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:光丽霞
20040601
垃司璃论文作者签名:司芪逮期:兰竺竺:豪第三军医大学研究生学位论文独创性声明第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究并表示谢意。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名:指导教师签名:日期:.日
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銮縃—/苑ρ趸肪矱杀伤作用的研究肉瘤细胞摘要的重要原因之一。本研究拟构建一种由缺氧反应元件【调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶訮法扩增基因片断,,获得重组质粒皃。醚衾胱又侍褰玴猅及一导入—一庑蚪峁な担褐刈橹柿琀片断,序列正确,且为单拷贝正向插员雀髯镾瓻细胞荧光光密度值发现:①在乏氧环境中培养,组和—组细胞荧光光密度值显著高于富氧环境培养组的荧光光密度值,龋孩谠诜ρ趸肪撑嘌拢琾楹蚿甌橄赴ü夤饷芏认灾哂趐组和空载体组,虎嘣诟谎趸肪撑嘌母髯橄赴溆ü夤饷芏任尴灾钜臁目的恶性实体肿瘤中心乏氧区肿瘤细胞对放疗、化疗的耐受性是导致治疗失败基因的真核表达载体,观察芊裨銮縃跄褴珿统对乏氧环境中的人饬鱿赴..赴的杀伤作用,为弥补放、化疗的不足探索有效的治疗方法。ɑХê铣傻腍片断,插入到空载体瓻的双顺反子荧光蛋白报告基因的真核启动子的增强子部位,按插入片段上下游载体序列合成引物,以椒ㄉ秆『琀片断的阳性克隆,测序鉴定,获得重组质粒;用引物蛋白报告基因上游的多克隆位点,用秆『タ奖凑虿迦隩蔚难粜钥寺。胞,分别在乏氧ǘ任%透谎浓度为%肪持信嘌∈保光显微镜观察报告基因增强型绿色荧光蛋白表达变化,进行荧光光密度分析:再予以砩鲜鲋柿WH鞠赴天后,用四唑盐法法觳釭对细胞的杀伤效果。入:重组质粒皃甌タ奖凑虿迦氲腍希蛄姓贰方法结果第三军医大学硕士学位论文猼,,
员菺对各组细胞杀伤效果发现:①在乏氧、富氧两种环境培其敏感性随ǘ仍黾佣銮浚虎谠诜ρ趸肪撑嘌膒组细胞对差异;③—组细胞,欢诜ρ酢⒏谎趿街只肪撑嘌膒组细胞对养的—和橄赴訥的敏感性均明显高于组细胞,,,而在富氧环境中,.组与槲尴灾拿舾行晕尴灾钜臁晒Φ毓菇撕蠬及基因片断的真核表达载体;灾銮縃疓对乏氧环境中饬鱿赴纳鄙诵省关键词:缺氧反应元件;单纯疱疹病毒胸苷激酶;饬鱿赴结论第三军医大学硕士学位论文
銮縃—/苑ρ趸肪矱肉瘤细胞杀伤作用的研究纍饬鍪且恢趾梅⒂谇嗌倌甑亩裥匀碜橹堤逯琢觯缙诩追⑸巍⒘馨区,该区域内的肿瘤细胞对放疗、化疗均有一定耐受性,常导致治疗失败。肿瘤内的乏氧微环境使肿瘤细胞的某些缺氧反应基因表达增强,包括编码促红细糖酵解酶基因等。庑┗虻谋泶锊铮唤瞿苁怪琢鱿赴视Ψρ跷⒒肪场⒃銮其侵袭性,同时使肿瘤细胞对放化疗的耐受性增强。研究表明,在调控这些缺氧反应基因表达的信号通路上,缺氧诱导因子肿瘤及其转移灶中表达普遍增强畆,因肿瘤组织内乏氧微环境和许多癌基因均可诱导琀岷喜拍艽俳毖醴从虻淖B蓟钚栽黾涌贗。的舳忧埃庵种柿T谌毖趸肪持懈伟┫赴谟ü馑孛富虮泶锪吭龈倍,肿瘤自杀基因治疗,被认为是肿瘤基因治疗中具有应用前景的方法之一。单纯疱乌苷,是目前研究、应用最广泛的肿瘤自杀基因治