文档介绍：聊擗啵南艽研究一唾小凤翩麟锄幺研究生签名:孕心、劬/拜夕月弓湛河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺研究生学位论文独创性声明疍年拢海豢谌本学位论文在导师蛑傅夹∽的指导下,由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学、实验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应的法律责任。本论文实在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。】
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录目中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..研究论文丙型肝炎病毒重组腺病毒疫苗疎皉/氖笛檠个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。月吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯综帧致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
丙型肝炎病毒重组腺病毒疫苗疎皉/氖笛檠芯琀腥臼且桓鋈蛐越康问题,。因此,开发有效的预防和治疗性呙纾统闪艘桓鲐酱饩的问题。蛋白是钪匾5闹泻桶锌乖捎盏蓟宀鶫的中和抗体,但因其能与人分子结合,使赴せ畹恼P藕糯ǖ通路发生变化,导致馨拖赴囊斐<せ詈驮鲋澄陕遥佣庖抑制作用而可能不适合用作疫苗的靶抗原。现已证明分子结合的位点包括蛋白的及位氨基酸残基,对这两个位点进行突变使之不再结合人分子而仍然保持其天然构型和中和表位。故这种结构优化的蛋白有望成为丙肝疫苗的有效靶抗原。腺病毒以其广泛的宿主范围、极高的转染效率、高水平表达外源基因且诱导机体产生针对目的蛋白的免疫应答、上调抗原提呈细胞协同刺激因子的表达、无插入突变性等优点,成为极具应用前景的基因转移载因此,本实验利用腺病毒载体系统构建、包装重组腺病毒△⑶叶詒/诱导的特异性免疫应答进行了研究,为丙型肝炎疫苗的研制探索新的途径。方法:康幕虻睦┰鲇爰ǎ阂詐二/为模板,扩增目的基因。;惺芴鶨.,提取质粒进行⒚盖屑ḿ安庑颍秆≈,胶回收目的片段,。经转化、筛选、:分别在摘要目的:丙型肝炎病毒蛋白中与体。疎/中文摘要、
及位氨基酸残基序列中随机选择预突变位点的半胱氨酸预突变为苯丙氨酸;的脯氨酸分别预突变为亮氨酸、丙氨酸魃杓埔欢酝槐湟铮缓蠓直鹨詐/为模板进行一步法榈嫉耐槐浞从Γ玫搅街侄懒⒑、.鱁冢蝗缓笤儆孟露涡蛄械耐槐湟物,。刈榇┧笾柿5墓建:/△用恰当的限制性内切酶双酶切,回收纯化目的片段,,经转化、筛选、兔盖屑ǎ菇ㄖ刈榇┧笾柿/、.疉。刈橄俨《局柿5墓菇ǎ将重组穿梭质粒/、/直鹩媚谇咝曰肁低常讲椒ㄔ诖蟪Ω司鶥杏骨架载体同源重组,构建重组腺病毒质粒疎/盖屑ǎ粜灾柿W;惺芴珽.,挑取阳性克隆,以碱裂解法大量提取重组质粒,并用聚乙二醇沉淀法进行纯化。刈橄俨《镜陌坝肜┰觯航刈橄俨《局柿疎/直鹩媚谇忻窹咝曰匝衾胱又侍宸ㄗH细胞,并观察绿色荧光蛋珿谋达。冻融法收集初代病毒液。取初代病毒液感染赴械诙扩增,同法进行第三、四轮大量扩增,大量收集第四代病毒液,用腺病毒纯化试剂盒进行纯化。刈橄俨《镜味炔舛ǎ捍细胞在孔板中生长至.%汇合时,以不同稀释倍数的各代病毒液感染细胞,培养螅訥阳性细胞计数法测定病毒滴度《镜味荧光细胞数×病毒液的稀释倍数/病毒液量用直鸲灾刈橄俨毒进行鉴定,同时用第三代重组腺病毒疎腥细胞,.后,收集细胞,法检测的表达。ɡ┰霾⒋化本室前期构建的,并测定病毒滴度。用碱裂解法从转化的大肠杆菌中提取质粒/,用聚乙二醇沉淀法进行纯化。动物实验:将周龄雄性/∈笏婊治组,分别为疎笛樽椤/阳性对照组、阴性对照组和瞻酶用,中文摘要
对照组。疫苗采用股四头肌注射,其中疎楹虯槊考涓周免疫~次,共免疫两次;.疎楹