文档介绍：四川大学
博士学位论文
白血病细胞药物敏感实验和HSP70在耐药机制中作用的研究
姓名:何璐璐
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:符仁义
20040501
中文摘要
白血病细胞药物敏感实验和。在
耐药机制中作用的研究
研究生何璐璐
导师符仁义教授
多药耐药性的形成是白血病患儿化疗失败、复发的主要原因。在白
血病细胞中大多存在与基因的异常表达,而且在多种应激
束激下二者的表达均在转录水平受的调节。目前国内外对
与基因之间的相互关系还不十分清楚。因此本实验首先研究白血
病患儿体外药物敏感性,观察初治患儿体外对多种化疗药物的原发耐药
情况,继而研究化疗药物处理后白血病细胞的获得性耐药现象,探讨在
此过程中白血病细胞与基因的表达情况,研究在
白血病化疗耐药性中的作用,以及中药棚皮素逆转白血病细胞耐药性的
机制,为小儿白血病的实验研究和临床治疗提供理论依据。
本研究分四部分。第一部分采用法测定例白血病患儿外周
血或骨髓自血病细胞对阿糖胞昔、的塞米松· 阿霉素
、柔红霉素长春新碱、依托伯、左
旋门冬酞胺酶、环磷酞胺等化疗药物的敏感性。结果
例患者中例,例,例,例,体外药敏与体内疗
效总符合率,阳性符合率,阴性符合率敏感度
特异度
第二部分采用恒温水浴法分别给予细胞非致死性的高温
热休克后在不同复温时间收集细胞。采用免疫组化检测
蛋白表达,检测的表达。结果
免疫组化结果显示在相同高温诱导下蛋白表达较正常对照组明显
增加随着复温时间的延长表达量有增多趋势,呈“核内迁移”现象。
复温后表达开始降低,时接近对照组水平。℃热休克组
与正常对照组相比表达量无变化。检测细胞
的表达,与对照组相比在相同热休克条件下随复
温时间的延长, 一者的表达升高,时较对照组分别升高倍和倍,
后回落到对照组水平。
第三部分采用法检测不同浓度阿霉素以及热休克加阿霉素化疗
对及耐药细胞的生长抑制率。流式细胞术检测细胞
功能。检测不同浓度阿霉素以及热休克加阿霉素化疗对两种
细胞系细胞以及的表达的影响。结果高浓度
阿霉素对细胞、细胞生长均有产生了不同程度的抑制作
用,以细胞为明显。两种细胞系细胞在热休克处理后加入阿霉素,
与单纯加阿霉素组相比对细胞的生长抑制作用降低。与对照组相比,
细胞在℃热休克后加阿霉素组及单纯阿霉素化疗组
的表达均上调。随着阿霉素浓度
的增加, 细胞中的表达有逐渐
增加趋势,目显著高于正常对照组流式细胞术检测到阿
霉素作用细胞后细胞内阿霉素荧光强度减弱,细胞表现为耐药。
第四部分采用法检测棚皮素对细胞的生长抑制作用。
检测细胞在阿霉素化疗加棚皮素、棚皮素加阿霉素化疗后
以及的表达,细胞在梅皮素加阿霉素
什竿节后者情况。结果棚皮素对细胞的生长抑制作用
随着浓度的增加而增强。棚皮素加阿霉素化疗组细
胞中以及的表达均显著降低。阿霉素化疗加棚皮素
组与阿霉素化疗组细胞中的表达差异无显著性,
的表达在两组中亦无显著性差异。
综合以上研究,可以得出法简便、快速、客观,有利于临床合
理选用化疗药物以提高疗效,对指导白血病个体化化疗具有较高的实用
价值。对细胞的研究中发现热休克、阿霉素可以诱导
细胞中的过量表达,以维持细胞的自身稳定性
细胞内高表达的基因及其产物相应增加是细胞对
化疗药物敏感性降低的重要原因工参与了白血病细胞耐药性的形
成预热可增加白血病细胞对阿霉素刺激的耐受性棚皮素能够增加白
血病细胞对阿霉素的敏感性,逆转白血病细胞对阿霉素的耐药性。
关键词法热休克蛋白多药耐药热休克化疗
棚皮素白血病
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白血病细胞药物敏感实验和在
耐药机制中作用的研究
研究生何璐璐
导师符仁义教授
前言
白血病细胞对抗肿瘤药物产生耐药性是化疗失败的重要原因。有些
肿瘤细胞对某些抗恶性肿瘤药有天然耐药性,即对药物一开始就不敏感。
有的肿瘤细胞对原来敏感的药物,治疗一段时间后才产生不敏感现象称
之为获得性耐药。研究认为多药耐药基因及其产物
糖蛋白的过度表达是肿瘤细胞产生耐药性,导致临床化疗失败的重要
因素作为一种酶依赖性的药物泵,其功能是将带有正电荷
的化疗药物通过膜通道排出细胞外,从而使细胞在降低了的药物环境中
生存,并对不同亲脂类药物产生交叉耐药性,起到保护细胞的作用
人类家族由和组成,编码相应的一糖蛋白,但
只有及其基因产物起着多药耐药性的作用。研究发现耐药肿瘤细
胞常过度表达及其产物,而药物敏感细胞和
的