文档介绍：生物制药****题 1、生物技术药物:采用现代生物技术人为地创造一些条件,借助某些微生物来生产所需的医药品,称为生物技术药物。 2、利用基因工程生产药物的优点:1),利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽(如胰岛素、干扰素、细胞因子等),为临床使用建立有效的保障。2),可以提供足够数量的生理活性物质,以便对其生理、生化和结构进行深入的研究,从而扩大这些物质得应用范围。 3),利用基因工程技术可以发掘更多内源性的生理活性物质。4)内源生理活性物质在作为药物使用时,存在不足之处,可以通过基因工程和蛋白质工程对其进行改造。如白细胞介素-2第 125 位半胱氨酸是游离的,有可能引起二硫键的错配从而导致活性下降,将此半胱氨酸改为丝氨酸或丙氨酸后,白细胞介素-2的活性及热稳定性均有提高。 5),利用基因工程技术可获得新型化合物,扩大药物筛选来源。 3、反转录获得目的基因的过程:1), mRNA 的纯化;2) cDNA 第一链的合成; 3), cDNA 第二链的合成;4), cDNA 的克隆;5),将重组体导入细胞;6) cDNA 文库的鉴定; 7),目的 cDNA 克隆的分离与鉴定。 4、影响基因工程菌生产的因素有哪些?如何控制? 5、分离纯化常用的色谱分离法以及原理? 1),离子交换层析:( Ion Exchange Chromatography 简称为 IEC )是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。原理: 2),疏水层析:利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水基团相互作用力的差异,对蛋白质组分进行分离的层析方法。原理: 蛋白质表面一般有疏水与亲水集团,疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性,与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。在洗脱时,将盐浓度逐渐降低,因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化,可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质。 3),反相层析:在吸附层析中,高极性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类,洗脱液用极性强的溶剂,如甲醇和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附,最先洗下来,得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反,故称为反相层析。原理: 基于溶质分子与固定相中键合在基质上的疏水性配基间的疏水相互作用。 4),亲和层析: 原理: 5),凝胶过滤层析: 原理: 6),高效液相层析: 原理: 6、基因工程细胞的构建及筛选过程。 7、什麽是高密度发酵? 高密度发酵是个相对概念,一般是指培养液中工程菌的菌体浓度在 50gDCW/L 以上,理论上的最高值可达 200gDCW/L 。名词解释: 1、干扰素:( interferon , IFN )是人体细胞分泌的一种活性蛋白质,具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性,是人体防御细胞的重要组成部分。 2、固定化酶:是指限定或固定在特定空间位置的酶,具体来说,是指经过化学或物理方法处理,使酶变成不易随水流失即运动受到限制,而又能发挥催化作用的酶制剂。 3、半连续式操作:培养液一起装入发酵罐,一次性接种。间歇取出部分发酵培养物(带放),同时补充同等数量的新培养基;然后继续培养,直至发酵结束。 4、灌流式操作:培养液一起装