文档介绍：[文章编号]1671—8178(2003)04—0065—05酶联免疫吸附反应的技术进展及应用李文敏(湖北职业技术学院,湖北孝感432000)―[摘要「以常规的酶联免疫吸附法为基础,不断改进,形成了多种酶联免疫吸附法,如模块化ELISA、双位点T法,捕获法测igM抗体,生物素、亲^素系统,斑点酶链免疫吸附试验,***纤维素膜微粒ELISA等方法。酶链免疫吸附法在医药,食品加工业,农牧渔业等领域有着广泛的应用:如乙型肝炎,莱姆病,急性心肌梗死的早期诊断,定量检测内***,HIV抗体初筛,SARS病毒的快速检测;检测食品中的***,残留农药,微生物及其它成分;检测香蕉有关病毒,小麦黄花叶病毒,棉花黄萎病菌***,转Bt基因抗虫棉,检测水产品中***霉素的残留量,猪细小病毒(PPV)血清抗体,禽脑脊髓抗体等。[关键词]酶联免疫吸附试验;改进;方法;应用[中图分类号]K392-33 [文献标识码]A先将所有血清IgM固定在固相上,在除去IgG后再定特异性IgM也单克隆抗体捕获ELISA(Mac酶联免疫吸附法(ELISA;enzyme—linkedimmunosorbentassav)是1971年由Engvall等立的一种生物活性物顽微量测定新技术,以其灵敏度高(可达ng甚至p***平),特异性好等优点,在生命科学各领域得到广泛应用,它已迈出医药、临床领域,步入农业、渔业、畜牧业和食品加工业。常规的ELISA测定法有:间接法、双抗体夹心法和抗原竞争法。在实际应用过程中,该技术常不断改进,形成了多种分析方法,并且在检测的灵敏度、特异性、操作简单化以及实时、高效等方面都有很大提高,可以说ELISA是当前应用最广、发展最快的一项微量测定技术。,常规的检测方法有所改进,如小分子夹心ELISA,双抗原夹心ELISA测定抗体,组合单克隆抗体夹心Dot-ELISA测抗原,同步ELISA测定多种抗体,模块法(blockingELISA)测抗体等;目前,还开展了ELISA的新的测定方法(与其它技术结合),如双位点一步法,捕获法测IgM抗体,亲和素一生物素的ELISA,斑点酶联免疫吸附试验,NC膜微粒ELISA,磁颗粒ELISA,酶联免疫荧光测量法(ELIFA),免疫印迹技术与层析一ELISA等气下面主要介绍blockingELISA,双位点一步法,捕获法测IgM抗体,亲和素一生物素的ELISA,斑点酶联免疫吸附试验,(blockingELISA)BraneKrtS在研究梭状芽抱杆菌的B一抗***时,用了此法。首先将已知抗原和被测血清在室温下,60分钟充分混合或4C,过夜孵化后包被,其目的是使抗原与被测血清中的抗体可充分反应;其它步骤与常规ELISA法相同,既加入酶标抗***后,再加入酶作用底物。BraneKrt把五种ELISA法通过阳性血清和阴性血清吸光率的差别进行比较,认为blockingELISA法阳性和阴性血清吸光率差别最大,因此,此法的敏感性和特异性最高(较其它五种)。:在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步法不但简化了操作,缩短了反应时间,如果使用高亲