文档介绍：学院
本科生毕业设计(论文)
题目
粗毛栓菌漆酶cDNA的PCR扩增
姓名
学号
系别
生命科学系
专业
生物工程
指导教师
职称教授
2010 年月日
学院教务处制
摘要:
本实验以半纤维素作碳源培养粗毛栓菌9-12d,收集菌丝体,提取总RNA,做RT-PCR,扩增出两条漆酶cDNA片段。
关键词:
粗毛栓菌,漆酶cDNA,RT-PCR扩增
Abstract:Total RNA was extracted from Trametes gallica Fr. cailtiated for 12 days in hemicellulose medium. RT-PCR was carried out at tow cDNA fragments were amplified.
Key words: Trametes gallica Fr., ase cDNA, RT-PCR
指导教师评语:
该生认真查阅参考文献,实验方案设计合理,在规定时间内完成了预定任务,初步掌握了从事有关研究的基本实验技能,具备了一定的独立从事科学研究的能力,达到了本科生的培养目标。该文达到了学士学位论文水平。
指导教师签名: 年月日
论文等级:
系负责人(签章): 年月日
系审核意见:
系公章: 年月日
填写说明
用蓝色或黑色墨水的钢笔(或签字笔)填写,书写要清晰、工整、规范,不得打印。
此表一式两份。一份装入学生档案;一份按此表、开题报告、中期检查表、成绩评定表、论文正文的顺序装订成册,留系存档。
目录
引言 2
1实验材料与方法 2
2
使用试剂和仪器 3
使用仪器 3
所用试剂 3
准备实验 3
总RNA的提取 4
总RNA纯度与浓度的检测 4
RNA纯度测定 4
RNA浓度测定 4
总RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 4
RT-PCR反应 5
引物的设计………………………………………………………………5
RT-PCR反应 6
DNA电泳 5
2 结果与分析 6
总RNA提取后的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳结果 6
2 .2 RNA浓度及纯度检测 7
逆转录及PCR反应 7
DNA核酸电泳 7
3 讨论 7
参考文献 8
致谢 9
粗毛栓漆酶cDNA的PCR扩增
摘要本实验主要以粗毛栓菌为材料,收集菌丝体。提取总RNA,做RT-PCR以扩增漆酶cDNA,漆酶DNA得到扩增。
关键词粗毛栓菌,漆酶cDNA,RT-PCR扩增
PCR Amplification of ase cDNA in Trametesec gallica
Abstract Total RNA was extracted from Trametes gallica . RT-PCR was carried out for amplification of ase cDNA and ase was amplified.
Key words Trametes gallica, ase cDNA, RT-PCR
引言
漆酶(ase,Lac)是一种多酚氧化酶, 在结构和功能上与植物抗坏血酸氧化酶、哺乳动物血浆铜蓝蛋白存在着许多相似之处[2]。它是最简单的多铜氧化酶, 一般含有4个铜原子, 分布于3个高度保守的不同结合位点, 每个铜原子在催化机制中都有很重要的作用。漆酶能催化 O2通过4个电子还原成水, 并且伴随着一些酚类底物的氧化[3]。它最早是从漆树的分泌物中发现的, 随后人们发现一些高等真菌也能分泌这种酶。现在人们知道, 漆酶广泛存在于担子菌、半知菌和子囊菌中, 但其中最主要的生产者是担子菌中的白腐菌[4],粗毛栓菌(Trametes gallica)是一种白腐担子菌,在我国分布广泛,是杨木的一种主要生物降解者。已有研究表明,该菌产漆酶能力较高[5]。
漆酶早期的研究主要集中在体内功能的研究,随着20世纪70年代前后聚丙烯酰胺凝胶电泳和分子克隆等生物学技术的问世, 漆酶的研究也揭开了新的一页。在国外很多菌种的漆酶基因得到了克隆并且进行了分析和鉴定, 一些漆酶基因也实现了其异源表达[6]。漆酶在木质素降解、微生物菌体形态形成等方面具有重要功能[6],普通微生物产漆酶的量及纯度不足以大规模的工业应用。要工业化生产漆酶,可通过把可高效产漆酶的基因与载体重组,然后导入受体细胞,形成稳定转化子,大批量培养,使漆酶进行异源表达。因此必须进行漆酶基因的测序,了解基因组成及酶切位点等,以便