文档介绍：细胞生物学实验报告——植物凝集素介导的细胞凝集反应 1 图 1. 凝集素介导的细胞与分子或细胞间相互作用模型(引自 Chapman and Hall 1989 ) 。 A. 同种细胞间相互作用。 B. 不同种细胞间相互作用。在本实验中,土豆块茎凝集素介导的红细胞凝集属于 A类中由上至下数第二种类型,即凝集素可溶,可以同时与两个红细胞表面的糖蛋白寡糖链结合,在两个红细胞之间形成连接。山东大学细胞生物学实验报告植物凝集素介导的红细胞凝集反应姜政 2012/10/6 实验目的: 观察凝血的过程和凝血后红细胞的聚集状态,理解细胞间凝集反应与细胞膜表面结构的关系,了解植物凝集素使红细胞凝集的基本原理和凝集素的应用领域。实验原理: 凝集素( Lectins )是一种能与细胞膜表面糖蛋白寡糖链特异性结合的蛋白质,多数含糖,广泛存在于植物提取物、动物组织、各种微生物包括病毒中, 其中以植物凝集素( Phytohemagglutinin ,PHA ) 分离到的种类最多。植物凝集素在植物体内主要参与防卫机制[ 1 ] , 识别入侵微生物和愈合伤口,在豆类植物中,凝集素还与植物与特定固氮菌形成共生有关[ 2 ] ;在体外, 凝集素最典型的效应是引起细胞凝集。通常认为, 凝集素介导细胞凝集的基本原理是: 可溶性凝集素分子能与细胞膜表面的糖蛋白寡糖链特异性结合,使不同细胞的糖蛋白通过凝集素分子彼此连结,进而引起细胞间凝集(图 1 ) 。红细胞膜表面有大量糖蛋白,其中一些糖蛋白具有特异性,比如人类 A型红细胞表面的α- N - 乙酰- D -半乳糖***和 O型红细胞表面的α- L -海藻糖就分别决定了人类的 A血型和 O 血型[ 3 ]。本实验就是利用植物凝集素与红细胞表面糖蛋白受体的特异性结合实现红细胞凝集。土豆块茎凝集素(potato tuber lectin )是一种能结合几丁质的富含羟脯氨酸的糖蛋白,单体分子量约 50, 000 ,包含至少三个不同的结构域,其中富含胱氨酸的区域与麦胚凝集素(wheat germ agglutinin , WGA )等几丁质结合蛋白具有同源性[ 1 , 4 ] 。土豆凝集素含有 50% (质量分数)的糖组分,其中 90% 是阿拉伯糖, 另有少量半乳糖;最丰富的氨基酸是羟脯氨酸,其次是半胱氨酸。土豆凝集素在水溶液中主要以单体形式存在,能与细胞膜寡糖链上的 N -乙酰葡萄糖***特异性结合[ 5 ],这是其具有凝集活性的主要原因。鉴于凝集素对糖蛋白的特异性结合,凝集素常被用于糖蛋白的分离、纯化,此外,一些凝集素还可诱导细胞分裂。在临床医学领域,凝集素被广泛应用于血型鉴定,疾病诊断(如凝集素芯片) 等。比如在动物体内, 巨噬细胞表面凝集素对半乳糖和 N -乙酰半乳糖***的特异性结合使得巨噬细胞能特异性地区分肿瘤细胞和正常细胞并杀死肿瘤细胞[2],利用巨噬细胞表面凝集素可以筛选肿瘤细胞。材料、试剂: 兔血红细胞,土豆块茎粗提液(含土豆凝集素) ,PBS 缓冲液,生理盐水实验方法: 制备 2% 家兔红细胞悬液,与土豆块茎粗提液各一滴在双凹载玻片上混合,轻轻摇晃使细胞悬液与土豆提取液充分混匀,观察凝集情况。另以生理盐水在同一玻片上作阴性对照。细胞生物学实验报告——植物凝集素介导的细胞凝集反应 2 实验结果: 实验组对照组注: d图对照组棘形红细胞是由