文档介绍：厦门大学
硕士学位论文
靶向HBV的高效siRNA的筛选及体内、外抗病毒研究
姓名:张雅丽
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:张军
20080801
摘要进行了规模化筛选和验证,获得多个具有良好应用潜力的械悖=了相应的泶镏柿#糜诮薪徊降纳秆∈ü参郎侍庵唬现匚:人类健康。尽管预防疫苗免疫降低了乙肝发生率,但目前全世界仍有约贖感染者,当前的药物治疗方法尚不足于应对该挑战,因此迫切需要发展新的更为有效的治疗手段以对付耐病墙昀捶⑾值南赴谛蛄刑匾煨抑制基因表达的机制,将际跤τ糜诎ú《拘愿窝椎仍谀诘募膊≈瘟萍成为当前的研究热点,而获得兼具高效抑制特性和保守性特征的靶位是治疗方法获得成功应用的重要基础。本研究以生物信息学为辅助,通过建立多基因型赴托《锉泶锬P停訦基因组上潜在的械步应用际蹩7⑿滦鸵腋沃瘟品椒ㄌ峁┲匾; 本研究首先通过数据库获得鲆驯ǖ赖腍全基因组序列,应用镄畔⒀Чぷ髡径云浣腥ɑ蜃榈男蛄斜J匦苑治觯竦猛葱为%以上的高保守序列区段。采用步移法设计可靶向上述高保守序列区段的⑼ü齊寻行вΨ治鋈砑蟹治觯跎富竦隹墒侗鸩煌位点并具有高保守特征的候选械阈蛄校⒁詐T靥宸直鸸菇倍体克隆质粒的共转染实验检测不同訦的抑制效率。。同时通过对检测时间点与共转染质粒用量配比的比较分析,确定了较有利于筛选高效靶点的检测条件。在此基础上,将本研究构建的个包含候选泶镌<闹柿?寺》直鹩肷鲜鯤倍体克隆蛋白表达的抑制能力。结果显示,本研究选择设计的个稍诓煌潭上抑制谋泶铮渲胁糠职械愕膕体现出良好的抑制效果糠职械已申请发明专利,申请号:.。本研究选择了其中鲆种菩较好的械、、糜诮徊降难芯亢脱橹ぁMü鼵检测细胞毒性与细胞活力,和干扰素相关基因及表达水平检测显摘要
靶点的分别经思籽趸奘巍⒘姿峄奘魏凸檀夹奘蔚膕,对甆示上述霭械鉺在细胞中的表达不会引起的细胞活性及干扰素相关基因基因转录水平的异常变化,显示其无脱靶效应。技术应用于抗病毒治疗研究中另一重要方面是如何有效地将泶镌<既氚邢赴小Sτ肏表达细胞株狙芯刻教了通过重组慢病毒载体和化学修饰姆绞降既雜抑制泶锏可行性。本研究分别构建了可表达靶向、的的重组慢病毒,,以及针对同样细胞的转染实验结果显示,化学合成的苡行碌鱄细胞鞍椎谋泶铮渲芯奘魏蟮膕可表现出更好的抑制效果。为进一步验证本研究获得的诙锬P吞迥诙訦表达的抑制效果,本研究应用尾静脉高压注射法和不同基因型的倍体克隆建立了小鼠模型。通过检测血清样品中的表达及目奖词评估靶向、及的诙锬P投訦表达的抑制效果,结果显示本研究获得的靶向膕在小鼠体内可显著抑制不同基因型的谋泶镉敫粗啤关键词:乙型肝炎病毒:扇牛摘要
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