文档介绍：细胞生物学实验报告细胞原代培养姓名: 学号: 班级: 专业: 同组成员:一、实验原理细胞培养就是生物学与医学研究中最常用得手段之一,可分为原代培养与传代培养两种。原代培养就是直接从生物体获取组织或器官得一部分进行培养。由于培养得细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内得生活状态。这一方法可为研究生物体细胞得生长、代谢、。原代培养得方法:1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎,—3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。2、酶消化法将1mm3大小得组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml得0、125%得胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20-。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,离心800rpm5—10分钟收集细胞。弃上清,加入带有双抗得培养基,放入培养瓶培养。取材注意事项:。取材与原代细胞制作时,要用锋利得器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织,(血块)、脂肪、坏死组织及结缔组织,切碎组织时应避免组织干燥,可在含少量培养液得器皿中进行。 取材应注意组织类型、分化程度、年龄等,一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低得较分化高得组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养。二、实验目得1、理解细胞原代培养原理2、熟悉细胞原代培养方法与过程3、了解细胞原代培养得应用4、独立进行细胞原代培养操作三、实验材料手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。动物:9—12日龄得鸡胚蛋四、实验步骤1、购买9-12日龄鸡胚蛋。放入孵化箱中孵养待用。2、取鸡胚蛋一枚放入超净工作台中,用酒精棉球擦拭鸡蛋壳后,气室处擦拭两遍,用镊子小心去除气室部分得蛋壳。3、取D-hanks液按1:100加入双抗。4、换用洁净得无菌镊子揭开膜,再用洁净得无菌弯头镊子取出鸡胚至灭菌得培养皿中,并用D—、用眼科剪去除鸡胚得头部、四肢以及内脏,然后用D—、将洗涤过得躯干移至干净得培养皿,吸去多余得液体,然后用眼科剪将躯干充分剪碎(约四分之一米粒大小).7、向碎块中加入一滴管胎牛血清将组织碎块切散,用滴管将组织碎块接入培养瓶中,静置一分钟,再加入5ml完全培养液,将瓶子翻转倒置后在37度培养箱中放置2-3小时,待组织块微干与瓶壁贴牢后再将瓶子翻转过来,于培养箱中培养。8、将用过得试剂仪器等摆回原处,将超净台打扫干净,、实验后数小时后去观察组织块中细胞迁移情况,、实验结果原代培养过夜后第二天中午一点拍照,观察细胞迁移情况,以下就是我们小组得实验结果. 鸡胚成纤维细胞原代培养(倒置显微镜20×) 鸡胚成纤维细胞原代培养(倒置显微镜20×),,细胞迁移较多,大部分细胞活性较好,呈梭形附着与瓶壁上,:原代培养要注意无菌操作,实验过程中要保持组织块浸润在缓冲液中,接种组织块到培养瓶中后应待组织