文档介绍：293细胞培养293细胞是用5型腺病毒75株系转化,含有Ad5El区的人胚肾亚三倍体细胞系,是一种E1区缺陷互补细胞系。。293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种:贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长,也可生长在血淸浓度降低的培养基屮。单层培养细胞在5-10%FBS-DMEM+能生长很好。一般来讲,1:10传代后,一周可以长满。严禁过度生长,这点很重要。因为会导致细胞密度加大和堆积,影响病毒斑的形成和转染,传代时也不易打散。悬浮的293细胞很容易大规模培养,但不容易长期保持稳定。293细胞在传代120次以后,其表型可能改变,生长状况不再完全是单层的了,偶尔会形成局部的细胞成团聚集,应立即抛弃,重新引入新传代的细胞。293细胞培养特性:1、 293细胞明显适应酸性环境,〜,可顺利贴壁生长,换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。2、传代:倒去废液,PBS洗一次(轻),%%T「ypsin消化,生长良好细胞,培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s,然后吸去,再让剩下的EDTA^rypsin作用30s,镜下观察细胞变闘,就可加DMEM终止消化,反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时・24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合,传代比例为1:3o3、 293细胞在低代时容易贴壁,生长良好,在传到几十代以后,易聚集成团,且贴壁不牢,用PBS冲洗时即可能脱落,即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液,最好购入时先大量冻存。4、复苏293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同稈度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%〜80%时消化冻存,复苏时将其全部接种至2个50ml瓶屮时较为合适。刚复苏的293贴壁很慢,复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适,如果川一次性犁料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。5、转染:体外应用293细胞进行细胞转染时,如果是采用磷酸钙转染,一定要注意293细胞不要全部长满细胞培养盘,长满细胞时加入磷酸钙就会使293细胞大片的脱落,报好是当293生长到1/2或2/3时进行磷酸钙转染,可以避免细胞的大量脱落