文档介绍：第三章灭活剂、保护剂和免疫佐剂
第一节灭活剂
一、灭活与灭活剂
1、灭活概念
是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性,但尽可能不影响其免疫原性,被灭活的微生物主要用于生产灭活疫苗;或指破坏诊断血清或待检血清中的补体活性,以避免补体对诊断试验的干扰作用。
微生物毒力的灭活或毒素毒性灭活或补体活性灭活
2、灭活方法
物理方法(不用)
化学方法(常用)
3、灭活剂:用于灭活微生物的化学试剂或药物称为灭活剂
二、常用灭活剂的灭活机理与应用
(一) 灭活剂种类
1、甲醛溶液:
①蛋白质②核酸烷基化(不加中断剂)
2、烷化剂
乙酰基乙烯亚胺(AEI)
二乙烯亚胺(BEI)
缩水甘油醛
(使微生物核酸烷基化,灭活后加2%硫代硫酸钠中断灭活)
3、苯酚(石炭酸):用于防腐, 很少用于疫苗研制
4、结晶紫:蛋白质变性。(溶于有机溶剂)
用于诊断抗原的制备:鸡白痢抗原
5、β-丙酰内酯
病毒灭活剂,为狂犬病灭活苗制备所用.
注意:灭活剂对人有害, 有时对皮肤粘膜有强烈刺
激性如:甲醛、β-丙酰内酯
1、甲醛溶液:
《规程》(2000)中的26种灭活疫苗
灭活机理:
灭活浓度:%~%
灭活原则:低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的;
必要时可在灭活后加入硫代硫酸钠,以中断其反应。
氨基甲基胺
羧基亚甲基二醇单酯
巯基亚甲基二醇
甲醛
醛基
羟基羟基甲酚
2、烷化剂(alkylating agent)
乙酰基乙烯亚胺(AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘油醛
灭活机制:
1. 烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等,引起单链断裂或双螺旋链交联,因改变DNA的结构而破坏其功能,妨碍RNA的合成,从而抑制细胞的有丝分裂。
2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。
优点:能破坏病毒的核酸芯髓,使病毒完全丧失感染力,而
不损害其蛋白衣壳,保留其保护性抗原。
1)乙酰基乙烯亚胺(N-acetyl ethylenimine,AEI)
淡黄色澄明液体,有轻微氨臭味,能与水或醇任意混合。
0~4℃可保存1年,在-20℃可保存2年
AEI功能基团是乙烯亚胺基,可用于口蹄疫灭活苗。
口蹄疫病毒液: %,30℃8h, 加2%硫代硫酸钠阻断
2)二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)
%的BEI溶液,在0~4℃可保存1个月;
%, 加入2%硫代硫酸钠中断灭活。
3)缩水甘油醛(glycidaldchyde,GDA)
大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。
本品易挥发,水溶液含量为15~31mg/ml。
0~4℃ 3个月含量渐下降,约半年失效;20℃只能保存10d。
3、苯酚(石炭酸):用于防腐, 很少用于疫苗研制
4、结晶紫:蛋白质变性。(溶于有机溶剂)
用于诊断抗原的制备:鸡白痢抗原
4、-丙酰内酯(-propiolactone)又名羟基丙酸--内酯
无色有刺激气味的液体,水溶液应密封于玻璃瓶中5℃保存
水中溶解度37%,能与丙酮、醚和氯仿任意混合
对皮肤、粘膜及眼有强刺激性,对动物有致癌性。
病毒灭活后,能保持良好的免疫原性
主要用于狂犬病灭活疫苗的制备。
三、影响灭活作用的因素
1、灭活剂特异性:石炭酸对真菌和病毒效果差,甲醛最常用。
2、微生物种类和特性
3、灭活剂浓度(一定要适合)
4、灭活温度(具体不同病原体或毒素,其灭活时间和温度不一致)
5、灭活时间
6、灭活PH值
7、有机物存在
第二节保护剂(稳定剂)
保护剂:又称稳定剂(stabilizer) ,是指一类能防止生物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。(指对疫苗生产、血清制备等)
保护剂用途(不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生物或细胞)
①菌种或毒种保存:常用甘油作保护剂
②细胞株保存:常用二甲基亚砜(DMSO)
DMSO:二甲基亚砜,一种细胞的保护剂
③疫苗冷冻真空干燥制备时:加脱脂乳(或二甲基亚
砜)和蔗糖等(不同国家有不同配方)
④干扰素类生物活性物质的保存:加葡聚糖