文档介绍：常用血清学检测方法介绍一、酶联免疫吸附试验诊断技术目前,该项技术已在兽医学上得到广泛得应用,大多数动物传染病都已经研制成ELISA检测方法。1、酶联免疫吸附试验得原理ELISA得基础就是抗原或抗体得固相化及抗原或抗体得酶标记。结合在固相载体表面得抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记得抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶得活性。在测定时,受检标本(测定其中得抗体或抗原)。再加入酶标记得抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。,底物被酶催化成为有色产物,产物得量与标本中受检物质得量直接相关,,间接地放大了免疫反应得结果,、ELISA得类型根据试剂得来源与标本得情况以及检测得具体条件,可设计出各种不同类型得检测方法。用于动物疫病检测得ELISA主要有以下几种类型:①、,此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上得大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA,就就是根据这种原理设计得.②、,以检测相应得抗体。与间接法测抗体得不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。,需要根据抗原结构得不同,,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于于间接法。此外,该方法不受被检动物种属差异得限制.③、间接法测抗体间接法就是检测抗体常用得方法。其原理为利用酶标记得抗体(抗免疫球蛋白抗体),检测与固相抗原结合得受检抗体(见图1)。操作步骤如下:(1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原。洗涤除去未结合得抗原及杂质。(2)加稀释得受检血清,保温反应。血清中得特异抗体与固相抗原结合,,固相载体上只留下特异性抗体,血清中得其她成份在洗涤过程中被洗去。(3)加酶标抗抗体可用酶标抗人Ig以检测总抗体,但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中得抗体与酶标抗体抗体结合,从而间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上得酶量与标本中受检抗体得量正相关。(4)加底物显色本法主要用于对病原体抗体得检测而进行传染病得诊断。间接法得优点就是变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体得方法. 间接法在动物疫病抗体检测中应用广泛,例如禽流感得间接ELISA,用禽流感病毒NP蛋白包被成抗原板,待检血清中得抗体与之结合,再加酶标二抗反应,可以检测所有A型禽流感病毒抗体.④、竞争法测抗体当抗原材料中得干扰物质不易除去,或不易得到足够得纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中得抗体与一定量得酶标抗体竞争固相抗原。标本中抗体量越多,结合在固相上得酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。⑤、竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法得两个以上得位点,因此不能用双抗体夹心