文档介绍：实验一实验一细菌的染色细菌的染色尹会方尹会方 球菌杆菌弧菌实验二实验二细菌的简单染色和革兰氏染色细菌的简单染色和革兰氏染色??一、实验目的一、实验目的?? 1. 1. 学****掌握简单染色的操作技术和无菌操作学****掌握简单染色的操作技术和无菌操作技术。技术。?? 2. 2. 理解革兰氏染色机理,并掌握其操作技术。理解革兰氏染色机理,并掌握其操作技术。?? 3. ,掌握芽孢染色的方法。了解芽孢染色机理,掌握芽孢染色的方法。二、实验原理二、实验原理--- ---简单染色简单染色??细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别, 细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别, 必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色,使必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便, 观察到其形态和结构。此法操作简便, 适用于菌体一般形适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。状和细菌排列的观察。??常用常用碱性染料碱性染料进行简单染色,这是因为在中性、碱性或弱进行简单染色,这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中, 酸性溶液中, 细菌细胞通常带负电荷细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别。常用作简背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解等。当细菌分解糖类产酸使培养基糖类产酸使培养基 pH pH下降时,细菌所带正电荷增加,此时下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用可用伊红、酸性复红伊红、酸性复红或或刚果红刚果红等酸性染料染色。等酸性染料染色。二、实验原理二、实验原理--- ---简单染色简单染色??染色前必须固定细菌染色前必须固定细菌。其目的有二:一是杀。其目的有二:一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上;二是增加其死细菌并使菌体粘附于玻片上;二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形固定时尽量维持细胞原有的形。。二、实验原理二、实验原理--- ---革兰氏染色革兰氏染色??革兰氏染色法是革兰氏染色法是 1884 1884 年由丹麦病理学家年由丹麦病理学家 ChristainGram ChristainGram 氏创立的,革兰氏染色法可氏创立的,革兰氏染色法可将所有的细菌区分为将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌( (G+ G+)和)和革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌( (G- G-)两大类。革兰氏染色法)两大类。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是细菌学中最重要的鉴别染色法。??革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的结和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。构和组成不同决定的。二、实验原理二、实验原理--- ---革兰氏染色革兰氏染色??革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结结晶紫晶紫进行初染,再用进行初染,再用碘液媒染碘液媒染,然后用,然后用乙醇乙醇( (或***或***) )脱色脱色,最后,最后用复染剂用复染剂( (如番红如番红) )复染复染。。经此方法染色后,细胞保留初染剂经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色蓝紫色的的细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞中初染剂被细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色复染剂的颜色( (红红色色) ),该菌属于革兰氏阴性菌。,该菌属于革兰氏阴性菌。二、革兰氏染色机理二、革兰氏染色机理??当用当用结晶紫初染结晶紫初染后,像简单染色法一样,所有细菌后,像简单染色法一样,所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂,它能与都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物结晶紫一碘的复合物,从而增强了染,从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时, 料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时, 两类细菌两类细菌的脱色效果是不同的的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成,壁厚、类脂质含要由肽聚糖形成的网状结构组成,壁厚、类脂质含量低,