文档介绍：一、SDS法基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0°C放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。1、 试剂提収缓冲液Tris-HCl1OOmmoI/L(pH&O)EDTA50mmol/L()NaCl500mmol/L灭菌后加卩■藐基乙醇至10mmol/L裂解液20%SDS高盐溶液5mol/LKAcRNaseA1Omg/ml异丙醇⑹灭菌ddH2O或TE2、 仪器离心机,恒温水浴,台式高速离心机,电泳装置3、 实验程序、离心菌体,再用灭菌ddH20冲洗2次,放入经液氮预冷的研钵屮,加入液氮研磨至粉末状,用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500UL提取液的离心管中,轻轻混匀。、向管中加入50uL20%SDS溶液,混匀,不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂,65°C保温10min,并不时摇动。、加入150pL5mol/LKAc,混匀,置冰±20-30mine、4°C,15OOOrpm离心15min,转移上清到另一离心管中,,混匀,・20°C沉淀30min。>12OOOrpm离心10min冋收基因组DNA沉淀,吹干后加入适量的灭菌ddH20或TE溶解DNAo、加入1/10体积的RNaseA,37°C保温20min,除去RNA。、C:I抽提后,加2V乙醇,・20°C沉淀30mino12OOOrpm离心lOmin回收基因组DNA沉淀。、用400uL70%乙醇洗一次后,吹干,加入适量的灭菌ddH20或TE溶解DNAo、电泳检测完整性。二、lysedcellsdirectlybyphenol、试剂:1、 STEBuffer(100mMNaCl,10mMTris-HCl,1mMEDTA,)2、 TEbuffer(10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH&0)、实验程序1、 。离心菌体2、 400plSTEBuffer(100mMNaCl,lOmMTris-HCl,1mMEDTA,)洗2遍3、 8000gfor2min4、 Thepelletswereresuspendedin20011TEbuffer(10mMTris-HCl,1mMEDTA,)5^50mgof425-600pmsize-firactionatedglassbeads(Sigma)^100|ilTris-saturatedphenol()wasaddedtothesetubes,followedbyavortex-mixingstepof120-°anicphase・^40plTEbufferwasaddedtomake200glandmixedwith100glchloroform10>centrifugedfor5minat13OOOgat4°C11>Lysatewaspurifiedbychloroformextractionuntilawhiteinterfacewasnolongerpresent;thisproceduremighthavet