文档介绍：安徽农业大学
硕士学位论文
分离自安徽土壤绿僵菌物种和遗传多样性的研究
姓名:周玉宝
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:黄勃;李增智
2011-06
摘要
绿僵菌土壤分离株是一类重要的生物防治备选菌而备受关注。本文应用
ISSR 技术对安徽省土栖金龟子绿僵菌小孢变种 7 个居群 104 个个体的遗传多样
性及遗传分化进行研究,以揭示该地区土栖金龟子绿僵菌小孢变种居群的遗传多
样性水平和遗传结构,探讨遗传分化机制。同时依据形态学研究结果选取 13 株
土栖绿僵菌菌株,对其内转录间隔区(ITS)片段进行 PCR 扩增和序列测定,采用
Blast 方法将测序结果在 GenBank 中进行同源搜索,依据邻接法构建获得与其相
关菌株的 ITS 序列系统发育树,分析安徽土栖绿僵菌的物种多样性。主要研究结
果如下:
1 从60条ISSR引物中筛选出针对金龟子绿僵菌小孢变种8个特异性强、稳定
性好的引物进行ISSR分析。共获得位点数79个,其中多态位点数79个,多态位
点百分率为100%。
2 POPGEN32分析结果表明:金龟子绿僵菌小孢变种居群的平均多态位点百
分率为100%,Shannon表型多样性指数(I),具有丰富的的遗传多
样性,居群间存在一定程度的基因流()和遗传分化(Nei’s信息多样性
,),居群内的基因多样度占总居群的
%,%,表明安徽土栖金龟子绿僵菌小孢变种的变异主要来
源于居群内。
3 利用ISSR标记的结果,采用UPGMA聚类分析方法可将所有供试材料分为
7大类群。根据所划分的类群,发现安徽土栖绿僵菌之间的亲缘关系与地理来源
不存在相关性。
4 本研究通过对分离自安徽土壤的 13 株绿僵菌菌株的内转录间隔区(ITS)
片段进行 PCR 扩增和序列测定,采用 Blast 方法将测序结果在 GenBank 中进行
同源搜索,依据邻接法构建获得与其相关菌株的 ITS 序列系统发育树。结果表明,
供试菌株分别位于系统发育树的 3 个分支上,分支 1 包括 8 个菌株和金龟子绿僵
菌小孢变种,1 个菌株和金龟子绿僵菌鳞鳃金龟变种形成分支 3,另外 4 个菌株
和黄绿绿僵菌棉蚜变种聚为分支 10。再结合同源比较的数据,将这 8 个、4 个和
1 个绿僵菌菌株分别鉴定为金龟子绿僵菌小孢变种、黄绿绿僵菌棉蚜变种和金龟
子绿僵菌鳞鳃金龟变种。本研究进一步验证 ITS 序列的系统发育分析可为绿僵菌
属种的鉴定提供重要的参考依据。
关键词:金龟子绿僵菌小孢变种,ISSR,遗传多样性,ITS,系统发育
I
Abstract
Metarhizium isolates from soil have received considerable attention as a
important potential biological control agent of pest insects. To reveal the ic
relationship, ic structure and mechanism of ic differentiation of
Metarhizium anisopliae var. anisopliae isolated from Anhui soil, the ic diversity
and ic differentiation of 104 individuals in 7 Metarhizium anisopliae var.
anisopliae populations were studied by ISSR method. Meanwhile, 13 selected
Metarhizium strains based on morphological study were amplified and sequenced for
its internal transcribed spacer (ITS) sequence. To illustrate the species diversity of
Metarhizium isolated from Anhui soil, the ITS ic tree with the related
strains obtained by homology search on GenBank web site by using Blast method was
construc