文档介绍：分类号学号 M200971413
学校代码 10487 密级

硕士学位论文

靶向半胱氨酸组织蛋白酶家族的
溶酶体探针的研究

学位申请人: 聂斯
学科专业: 生物化学与分子生物学
指导教师: 张玉慧副教授
答辩日期:
A Thesis Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for
the Degree of Master of Science

Study on a Lysosomal Marker Targeting to
Cysteine Cathepsins

Candidate : Nie Si
Major : Biochemistry & Molecular Biology
Supervisor : Associate Prof. Zhang Yuhui

Huazhong University of Science & Technology
Wuhan, Hubei 430074, P. R. China
January, 2012
独创性声明

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日期: 年月日

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不保密□。
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学位论文作者签名: 指导教师签名:
日期: 年月日日期: 年月日
华中科技大学硕士学位论文
摘要*
溶酶体在细胞各种生命活动,包括物质代谢、细胞膜循环、细胞凋亡中发挥着
重要作用,如果它发生功能紊乱,会造成诸如肿瘤、炎症、矽肺等多种疾病的产生。
实现对溶酶体的标记,直观地检测物质在溶酶体的定位改变,不仅能够帮助理解溶
酶体参与生命活动的分子机制,而且对疾病的治疗具有重要的指导意义。
本课题利用基于活性组织蛋白酶家族的透膜小分子探针(CpFABPs),结合活性组
织蛋白酶家族位于溶酶体的特点,发展 CpFABPs 成为一种新型的溶酶体标记探针。
以 LysoTracker 荧光探针为标准物,经过共定位分析,课题证实 CpFABPs 在不
同的细胞系都能实现对溶酶体的标记,而且即使转变 CpFABPs 的荧光基团,这种标
记也几乎不受影响。在细胞裂解液和活细胞水平,通过直接标记或抑制剂的竞争性
标记分析,本文确认 CpFABPs 标记溶酶体的机制在于其对活性组织蛋白酶家族的特
异性标记作用。CpFABPs 共价结合组织蛋白酶的作用不易被破坏,因此其被成功地
应用于固定细胞、透化细胞和氯化铵处理细胞的溶酶体标记。CpFABPs 能够在活细胞
水平指示组织蛋白酶的位置变化,因此实现了对依赖溶酶体的细胞凋亡途径的检测。
综上所述,CpFABPs 不仅能够作为溶酶体的标记物,也可以对依赖溶酶体的细
胞凋亡进行检测,为溶酶体相关的研究提供了有力工具。

关键词:溶酶体溶酶体依赖细胞凋亡组织蛋白酶
基于酶活荧光小分子探针

*
该研究得到国家自然科学基金(30800183)和国家高技术研究发展计划(2008AA02Z107)的资助
I
华中科技大学硕士学位论文
Abstract
Lysosomes are membrane-enclosed vesicles which involved in a variety of life
activities including intracelluar digestion, cell membrane recycling, and apoptosis.
Lysosomal disfunctions could le