文档介绍：免疫学质量控制流程【目的】保证ELISA检测结果准确可*,充分发挥其方法学的优点。【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。【方法】【分析前质控】,因此检验人员需经过培训,熟练掌握本专业如下几方面的技术知识:[1]检验项目的基本原理(ELISA原理);[2]临床意义;[3]熟悉检测技巧,了解易出差错的环节及难点;[4]熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成,包被片段及其组成);熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识。[5][6]某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗。【试剂盒选择】卫生部规定乙肝试剂,丙肝试剂,必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格,并贴有防伪标签的产品。【试剂盒评价】试剂评价需要有权威的血清考核盘(Panel)进行检测,价格昂贵,操作繁琐,一般实验室不易开展,可以通过以下信息,了解试剂质量。,了解其质量水平,按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂;,如原料来源(基因工程或合成多肽),片段的组合(按比例混合或化学合成),片段的长短等判断试剂的优劣;,了解不同试剂的质控成绩。,了解市场上试剂的质量优劣。【仪器质控】为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序(SOP),所要控制的仪器包括移液器(加样枪),水浴箱(温箱),洗板机和酶标仪。.:ELISA加样量小(5-100ul),其准确性直接影响实验结果,利用称重法检查:吸取刻度指示量的水,万分之一天平称重后计算吸量是否准确,一般应在±10%以内;:经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中(或温箱内)实测温度是否一致,允许有±1℃的误差;:每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul,人工扣板时,垫纸不湿,定期检查管孔是否堵塞;:经常维护其光学部分,防止滤光片霉变,定期检测校正,使其保持良好的工作性能。酶标仪的主要性能指标有:测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。,准确性为±1%,%。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。~,,甚至更高。超出可测上限的A值常以?或潜敶屲或其它符号表示。应注意可测范围与线性范围的不同,线性范围常小于可测范围,~,~,这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。【酶标仪校正程序】:将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下,用UV-2201型紫外-可见分光光度计(波长精度±)于可见光区对每个滤光片进行扫描,其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。一般酶标仪无585nm滤光片,可选用550nm)。630nm滤光片的检定选用普鲁兰溶液(校正波长为450nm滤光片。:通道差检测是取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑,透明,无污染以酶标板架作载体,将其()置于8个通道的相应位置,蒸溜水调零,于490nm处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性,可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家,同一批号酶标2板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液()先后置于同一通道,蒸溜水调零,于490nm处检测,其误差大小用±。(稳定性观察):取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置,均加入200ul蒸馏水并调零,于490nm处每隔30分钟测一次,观察各个通道4小时内吸光度的变化。:每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同浓度的甲基橙溶解,蒸馏水调零,于490nm作双份平行测定,每日测二次(上下午各一次),连续测定20天。分别计算其批内精密度,日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV值。:用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液,于490nm平行测8次,取其均值。计算其回归方程,相关系数及标准估计误差s,并用±:取一分甲基橙溶液,分别加入3种不同浓度的溶血液(测定波长为490nm,校正波长为585nm),先后于8个通道检测,每个通道测3次,比较各组之间是否具有统计学差异,以考察双波长消除干扰组分的效果。【标本的采集和保存】.1.