文档介绍：纤维素酶基因的研究・・・-0712401031范艳群摘要:本文对纤维素晦产牛菌纤维素基因的研究进展进行了综述。关键字:纤维素酶;纤维素酶基因;克隆方法纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称,是一种具有催化纤维素分解成葡萄糖的生物活性蛋白质。纤维素酶最早是1906年Seilliere在蜗牛的消化液中发现的,它可将丰富的纤维素废资源转化为再生资源,解决能源、饲料和食品供应不足的问题,并可应用于酒精、白酒、酱油、饲料和纺织行业上纤维素酶的酶解效率不高,因此影响了其工业化生产和广泛应用。20世纪80年代以来,随着分子生物技术的发展,人们通过分子克隆等新方法掌握了纤维素酶的遗传特性及催化机理。进而为研究纤维素酶的生物合成,构建高效纤维素分解菌开辟了新的途径叫近10年来,随着现代生物技术的迅速发展,基因重组与其他一系列分子生物学技术得到了广泛的应用,使这一领域的研究更为深入⑷.1纤维素酶维素酶是一种复合酶,属生物催化剂,是水解纤维素以获取葡萄糖的酶系,它是由大约14000个葡萄糖残基通过1,4-糖昔键连接而成的线性聚合物,其基本重复单位为纤维二糖。纤维素酶包括纤维素内切酶、外切酶和葡萄糖昔酶。3种酶之间存在协同作用。因此,只有当3个主要成分的活性比例恰当时,才能有效地降解纤维素⑸。2纤维素酶基因由于利用纤维素酶的降解作用进行纤维素的生物转化有着广阔的前景,自70年代末就开始了纤维素酶基因的克隆叫现已从20多种细菌和数种真菌中克隆到了80余个纤维素酶基因并被测序。并且几乎所有已克隆的纤维素酶基因都已在大肠杆菌中表达目前,产纤维素酶微生物的研究主要几种在细菌和真菌两方面。,我们国家对细菌纤维素酶方面的研究是取得了不小进展的。郭成栓,等从一株产碱性纤维素酶的短小芽胞杆菌菌株119中克隆到了编码葡聚糖内切酶的基因,并对其基因序列及酶的结构域进行了分析预测。同时将该酶的基因在大肠杆菌中进行了表达,并测其在不同温度和pH值下的活力和稳定性,温度达到55€时,酶反应速度最快,在pH=5~9时具有较好的稳定性,与原始菌株的纤维素酶活性比较,两者很接近。熊鹏钧、文建军^从深海样品中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3,并通过16SrDNA序列分析表明是一株深海交替假单胞菌,对其进行了分离及对其低温碱性内切葡聚糖酶性质的初步研究和酶基因的克隆及序列分析。将该基因命名为celX,对酶性质的初步研究发现,celX的最适温度为40€,酶的最适pH值在6~7之间。且最重要的一个发现是该酶具有抗碱性。赵莹等““用Smal和SphI双酶切pMD182T-CBHII和以胸昔酸合成酶基因(thymidylatesynthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,将纯化的CBHII基因和表达载体pW425t大片段进行连接,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t-CBHII,将pW425t2CBHII转化至thyA基因缺陷型的乳酸杆菌感受态细胞中,并测得CBHII的反应最适温度为50°C,。当温度50°C,。尹捷,刘一苇等人阳成功克隆了一段来自腾冲