文档介绍：由引盘塑一一中文摘要??????????????????? l,:????1 万方数据中文摘要 ICOS、(sjogren’Ssyndrome,ss)是以口眼干燥、泪液唾液分泌减少,可累及多脏器为临床表现,以淋巴细胞高度浸润为病理特点的弥漫性结缔组织病,分为原发性和继发性。原发性干燥综合征(primary sjogren’S syndrome PSS)从发病到病变迁延的基础是免疫功能紊乱,外分泌腺管道上皮细胞可发挥抗原递呈作用,细胞识别抗原后T、B细胞增殖,促使B 细胞分化为浆细胞,进而产生大量免疫球蛋白、自身抗体,导致体液免疫过度的异常反应,聚集大量的各种细胞因子和炎症介质造成组织损伤。在此过程中有一类CD4+T细胞亚群,辅助B细胞,以趋化因子受体 CXCR5为主要表面标志物,高表达特异性ICOS、、CD40、, ,起着不可或缺的作用,这类细胞称为滤泡辅助性T细胞(follicular helper Tcell,Tfhcell)。目的:目前,国内外对Tfh细胞在SS中致病作用研究仍不是很全面, 本文主要是通过流式细胞术(flow cytometry FCM)检测外周血 CD4+CXCR5+T细胞表达率,实时定量PCR(RT-PCR)检测外周血CXCR5、 ICOS mRNA的表达量,免疫组织化学方法(Immunohistochemical IHC)检测唇腺组织中ICOS、,探讨Tfh细胞在干燥综合征发病过程中其数量及生物学功能发生异常的表现。方法: 1选取河北医科大学第二医院免疫风湿科2014年1月至2015年1月PSS 患者30例作为PSS组,男性2例,女性28例,年龄范围40~65岁之间, 平均年龄()岁,其中无系统损害患者20例,伴肺间质纤维化患者2例,肺动脉高压患者1例,免疫性血小板减少患者5例,肾小管酸中毒患者2例,入组前均未应用激素、免疫抑制剂等药物治疗。 (FCM):30例PSS患者作为PSS组,20例健康志愿者作为健康对照组,晨起空腹采外周静脉血lml,肝素钠抗凝,采用流式细胞术检测CD4+CXCR5+T细胞百分率,比较两组间的差异及与临床指标万方数据中文摘要的相关性。 (RT-PCR):30例PSS患者作为PSS组,20 例健康志愿者作为健康对照组,晨起空腹采外周静脉血5ml,EDTA抗凝的,用Real Time PCR方法检测PSS组和健康对照组外周血CXCR5 mRNA、ICOS mRNA表达量的变化情况。通过引物设计、提取样本总 RNA、逆转录合成cDNA,RT-PCR反应体系的建立,获得各样本实时扩增曲线图和样本扩增产物溶解曲线图,计算出各样本基因相对定量分析结果。 ):PSS患者唇腺组织为研究标本,共30例,同时选取下唇外伤、粘膜下囊肿等非自身免疫性疾病患者20例作为对照组, 所有研究对象的唇腺腺泡组织标本均由4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,HE 染色,免疫组织化学方法检测标本中ICOS、,以淋巴细胞浸润不同等级为观察基石,显微镜下观察两组间、等级间ICOS、 Bcl一6蛋白的表达、定位的差异,与淋巴细胞、浆细胞及正常唇腺组织间的相关性,以及与生发中心的形成可能存在的联系。 2临床指标归纳:回顾并总结PSS患者I临床指标,包括免疫球蛋白(IgA、 IgG、IgM)、血沉(ESR)、抗SSA/SSB抗体等,并与本实验所检测指标进行相关性分析。 3统计学分析:采用SPSS ,一般数据资料以(x±s)表示;两个独立样本比较服从正态分布,采用t检验,不服从正态分布采用秩和检验(U检验);多个独立样本比较服从正态分布采用方差分析,不服从正态分布采用秩和检验(H检验),计数资料比较采用卡方检验。两变量间的相关性分析,如服从正态分布采用pearson相关系数,不服从正态分布采用spearman相关系数。以检验水准a=,P<。结果: lFCM:PSS患者外周血中CD4+CXCR5+T细胞占CD4+T细胞百分率显著高于正常对照组,且有统计学意义(+ VS +, P=)。PSS组外周血中CD4+CXCR5+T细胞占CD4+T细胞百分率与临床指标血沉(ESR)、免疫球蛋白IgG、IgA、lgM均无相关性(, P=),(,P=),(,P=),(,P=)。万