文档介绍：2017-1-9 1色谱法的理论与实践色谱法的理论与实践 2017-1-9 2一、色谱基础理论概述??色谱法或称层析法色谱法或称层析法( ( chromatography chromatography )是一种物理或)是一种物理或物理化学的分离分析方法。物理化学的分离分析方法。?? 1906 1906 年俄国植物学家年俄国植物学家 Tswett M Tswett M 将碳将碳酸钙装在竖立的玻璃柱内,从顶端倒酸钙装在竖立的玻璃柱内,从顶端倒入植物色素的石油醚浸取液,并用石入植物色素的石油醚浸取液,并用石油醚冲洗,在柱的不同部位形成油醚冲洗,在柱的不同部位形成色带色带, , 因而命名为色谱法。因而命名为色谱法。 2017-1-9 3 ??色谱法是利用物质在不同的两相中色谱法是利用物质在不同的两相中分配、分配、吸附或其他亲和作用吸附或其他亲和作用的差异,通过多次重的差异,通过多次重复使微小的差别积累起来变成大的复使微小的差别积累起来变成大的差异差异, , 从而使混合物中各组分从而使混合物中各组分达到分离达到分离。。??色谱技术在近二十多年中的飞速发展已形色谱技术在近二十多年中的飞速发展已形成一门专门的科学,称为成一门专门的科学,称为色谱学色谱学。广泛应。广泛应用于各个领域,成为用于各个领域,成为多组分混合物多组分混合物的最重的最重要的要的分离分析分离分析方法。方法。 2017-1-9 4 二、色谱法的分类??按流动相与固定相的按流动相与固定相的分子聚集状态分子聚集状态分类分类??按流动相的分子聚集状态分类按流动相的分子聚集状态分类 GC GC , , LC LC ,超临界流体色谱( ,超临界流体色谱( SFC SFC ) ) ??按固定相的聚集状态分类按固定相的聚集状态分类气相色谱法(气-固,气-液) 液相色谱法(液-固,液-液) ??按按操作形式操作形式分类分类柱色谱,平面色谱,逆流分配 2017-1-9 5 ?按色谱过程的分离机制分类??吸附色谱吸附色谱( ( adsorption ~ adsorption ~ ) ) 利用吸附能力的差别利用吸附能力的差别. . ??分配色谱分配色谱( ( partition ~ partition ~ ) ) 利用分配系数的差别利用分配系数的差别. . ??空间(分子)排阻色谱空间(分子)排阻色谱( ( steric exclusion steric exclusion ~ ~)或称凝胶色谱法( )或称凝胶色谱法( gel ~ gel ~ ) ) 利用被测物分子大小不同而导致的渗透系利用被测物分子大小不同而导致的渗透系数差异数差异. . 2017-1-9 6 ??离子交换色谱离子交换色谱( ( ion exchange ~ ion exchange ~ ) ) 利用在离子交换树脂上的交换能力差别。利用在离子交换树脂上的交换能力差别。又可分为又可分为: : ??氨基酸分析( 氨基酸分析( aminoacid analysis aminoacid analysis ) ) ??离子色谱法( 离子色谱法( ion chromatography ion chromatography ) ) ??亲合色谱亲合色谱( ( affinity ~ affinity ~ ) ) 将生物活性配位基(酶、辅酶,抗体等) 将生物活性配位基(酶、辅酶,抗体等) 键合到载体表面形成固定相,利用亲合力键合到载体表面形成固定相,利用亲合力大小进行分离大小进行分离( (专用于蛋白质专用于蛋白质等生化样品)。等生化样品)。 2017-1-9 7 ??毛细管电色谱毛细管电色谱( ( capillary electro- ~ capillary electro- ~ ) ) 依靠色谱与电场两种作用力,利用分配依靠色谱与电场两种作用力,利用分配系数和电泳速度差别而分离。系数和电泳速度差别而分离。??毛细管电泳毛细管电泳( ( capillary electrophoresis capillary electrophoresis ) ) 以高压电场为驱动力,根据样品组分的以高压电场为驱动力,根据样品组分的淌度和分配系数而分离。淌度和分配系数而分离。??手性色谱手性色谱( ( chiral chromatography chiral chromatography ) ) 利用手性识别原理,用于手性药物的分利用手性识别原理,用于手性药物的分离分析。离分析。 2017-1-9 8 填充柱毛细管柱毛细管电色谱毛细管电泳柱色谱平面色谱逆流分配色谱 GC LC SFC CEC 色谱法经典液相色谱 HPLC 纸色谱法薄层色谱法薄膜色谱法 2017-1-9 9 ?热力学理论——塔