文档介绍：项目二超氧化物歧化酶的生产超氧化物歧化酶(英语:Superoxidedismutase,简称SOD)是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶。它广泛存在于各类动物、植物、微生物中,是一种重要的抗氧化剂,保护暴露于氧气中的细胞。SOD的概况:超氧化物歧化酶(SOD)的概念:超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶,是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。(即金属辅基的成分)可分为:(1)Fe-SOD(2)Mn-SOD(是SOD酶分子内所含金属离子Mn2+)(3)Cu-Zn-SOD():仪器、试剂和材料:-研钵,石英砂,烧杯(50mL),玻璃棒,pH计,冷冻离心机,离心管-新鲜蒜瓣-(),氯仿-乙醇混合液(氯仿-无水乙醇3:5),丙酮(用前预冷至-10℃)。操作步骤:整个操作过程在0到5℃条件下进行。(1)SOD酶的提取称取5g大蒜蒜瓣,加入石英研磨破碎细胞后,()15ml,继续研磨20min,使SOD酶充分溶解到缓冲液中,然后6000r/min冷冻离心15min,弃沉淀,取上清液。(2)-乙醇混合液搅拌15min,6000r/min离心15min,弃去沉淀,得到的上清液即为粗酶液。(3)SOD酶的沉淀分离粗酶液中加入等体积的冷丙酮,搅拌15min,6000/min离心15min,得到SOD酶沉淀。(4),,然后6000r/min离心15min,放弃沉淀,取上清液,用凝胶sephacylS-200进行纯化,然后超滤浓缩。(5)用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量(6)将浓缩冷冻干燥后即得成品。:原理:连苯三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出氧气,生成带色的中间产物。在自氧化过程的初始阶段,黄色中间产物的积累在滞后30~45s后就与时间成线性关系。中间产物在420nm处有强烈的光吸收,在有SOD存在时由于它能催化生成氧气与过氧化氢,从而阻止了中间物的积累,通过计算就可以求出SOD的活力。所需溶液的配制:(1)-KH2PO4缓冲溶液:25℃/L的KH2PO4混合后,用水稀释至2000mL。(2):。酶活性的测定:(1)-,在25±℃的恒温水浴中保温10min,然后加入在25±℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚溶液(空白管用10mmol/LHCL代替),迅速摇匀倒入1cm比色皿中,以空白管为参比,在325nm下,每隔30s测1次吸光值,连续记录3min,调节连苯三酚溶液用量,(±)D/min。经实验测得连苯三酚溶液的用量为6µ1。(2)