文档介绍：(ELISA)的原理熟悉酶联免疫吸附实验的操作方法了解其他免疫标记技术一、、实验原理免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光(IF)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后,在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术(酶免疫技术)。是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂,标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。特点:高度灵敏、特异、快速,定性、定量、定位分类:免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。免疫标记技术(immunolabellingtechnique)=免疫技术+。就是利用酶标记抗体或抗原,以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。Ag+AbEAgAbE+底物呈色反应酶免疫技术(enzymeimmunoassay)。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使抗原抗体反应在固相表面进行。ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定。ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。酶联免疫吸附试验ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay):(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。:抗原吸附在固相载体上,这个过程称为包被,加待测抗体,再加相应酶标记抗体,生成抗原--待测抗体--酶标记抗体的复合物,再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。同理也可包被抗体,测定抗原含量。由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。