文档介绍：桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡及Caspase 3基因表达的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
【摘要】目的探讨中药桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡的作用及对Caspase 3基因表达的影响。方法将MRL小鼠分为空白组、强的松组和桂枝组,检测MRL小鼠心肌组织凋亡细胞,计算心肌细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测心肌细胞凋亡基因Caspase 3表达,观察桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡的影响。结果桂枝能调控心肌细胞凋亡基因Caspase 3表达,即抑制Caspase 3表达,明显抑制心肌细胞凋亡(心肌细胞凋亡指数显著下降)。其疗效明显优于空白组(),有显著性差异,与强的松组疗效相当()。结论桂枝可能通过调控凋亡基因而抑制心肌细胞凋亡,从而延缓或部分逆转MRL心肌损害的发生、发展。
【关键词】 MRL小鼠; 细胞凋亡; Caspase 3基因表达
系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一种多因素参与的累及全身多脏器、多系统的自身免疫性疾病,现代医学多采用肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、非甾体抗炎药等治疗,但有明显的副作用,停药后病情也易反复,治疗现状不容乐观。目前在中医中药领域内寻找治疗SLE及SLE心肌损害的有效药物,并从调控凋亡基因、抑制细胞凋亡切入研究其作用机理,是一项很有裨益的探索。本实验对MRL小鼠应用桂枝进行了该方面的探讨。
1 材料与仪器
动物
8~10周龄雌性MRL小鼠,体质量20~25 g,由上海动物中心提供。
药品桂枝药物由河北工程大学附属教学中医院提供,强的松片由浙江仙居制药厂生产。
试剂RNA提取试剂Trizol Reagent购自华美生物工程公司,为Invitrogen公司产品;逆转录酶(AMV-RT ),核糖核酸酶抑制剂(RNasin),dNTP,Taq DNA聚合酶(Taq DNA polymerase),随机引物(Random primers),琼脂糖(agarose)均购自美国Promega 公司。
仪器756型紫外分光光度计为上海精密仪器厂生产;GeneAmp 9600型PCR仪为美国PE公司生产;RS-28高速低温离心机为德国贺利氏公司生产;超低温冰箱为德国贺利氏公司生产;UVP凝胶扫描系统由美国UVP 公司生产;微量移液器为德国Gilson公司生产;DYZ-22A型双恒定时电泳仪为北京市六一仪器厂生产;DYY-Ⅲ桥式电泳仪为北京市六一仪器厂生产。
2 方法
实验分组与给药36只雌性MRL小鼠,随机分为3组,即空白对照组,强的松组,桂枝组,各12只。空白对照组给予生理盐水灌胃1ml/d, g·ml-1·d-1, g·ml-1·d-1,分两次给予,各组灌胃3周后处死动物,取心室肌组织。
检测指标与方法
心肌细胞凋亡Ladder电泳用碱裂解法提取心肌MDA,洗涤,TE过夜溶解。制备1 5%的琼脂糖凝胶,加入DNA样品,以5V/cm的电压电泳1~2h,紫外透射仪观察DNA条带,成像、照片。
凋亡及相关基因检测迅速分