文档介绍：正向间接血凝谜验省疫控中心周迎春主要内容●背景原理●实验器材的优化试剂的优化●样品的优化●实验过程优化●判定标准●注意问题背景●正向间接血凝试验(HA是上世纪60年代在我国发展起来的血清学诊断技术,是一种用已知抗原检测未知抗体的试验方法,它的操作方法相对简单,实验原理也易于理解,在基层实验条件和技术相对落后的情况下经常被应用到在些动物疫病的免疫抗体检测、疫病诊断上具有现实意文。林琳等研究表明应用猪瘟正向间接血凝法(HA与斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELA)以及猪瘟抗体免凝金标试纸条比较:对规模化养猪场138份猪血清进检测,三种方检测抗体的阳性率结果接近。背景数十年来正向间接血凝试验技术不断完善,它具有简单、经济、快速、实用的特点,在我国有很大的用户群,近年来州兽医研究所生产的液体猪瘟和口蹄疫正向间接血凝试验的试剂用量在逐年加大。然而,正向间接血凝作为种薇量的定量反应试验,实验结果受操作技术影响较大七在何操作环节的绁漏都会使最后判定的结果与正确结论大相径庭。●为规范操作,本次培训就实验中器材、试剂样品、过程和判定标准等方面的优化做一综述,以期作为此实验的借鉴。二、原理正向间接血凝试验的原理是将可溶性抗原吸附于与免疫无关的载体(红细胞)表面,此吸附抗原的红细胞与相应的抗体结合,在有电解质存在的适宜条件下发生的肉眼可见的凝集性反应。o0.:20#△YY红细胞抗抗原致敏红细胞抗体红细胞凝集二、原理●充分理解正向间接血凝试验的原理,对整个试验的操作和结果判定都具有很大的指导意义。、实验器材的优化本实验所使用的实验器材包括微量血凝板,微量振荡器,移液器和吸头,为保证实验的顺利进行,要选择质量有保障,稳定性好的器材。、实验器材的优化1、徼量血凝板●实验室经常使用的是有机玻璃材质或者一次性的110°底角的96孔V型微量血凝板。有机玻璃板板可以叠放,不占实验室台面,处理样品量较大时合适,但每次用完需要清洗。清洗方法般先用清水漫泡,然后马上用高压清水冲洗,洗净后用手甩干板子倒置于37℃温箱中烘干。用前要先检查血凝板孔底是否干净,如发现有透光性差一点的孔,可用酒精棉签擦净。除了有机玻璃板以外,还有一次性血凝板,不清洗也不甩担心子不干净影响结果,但能叠放,测定少量样品适合。、实验器材的优化●2、微量振荡器使用振荡器振荡时间不宜超过10秒钟,振荡强度不能太大,先从小到大,中等强度即可。多块板叠加后振荡时要用手压住最上一板,以防上下的振动造成孔中液体溅出而影响实验结果的准确性。如果实验室没有它,也可用手轻拍血凝板的边缘即可、实验器材的优化3、单、多道微量移液器建议使用高质量的移液器,用定量移液器需要准备50微升和25微升两种。50徼升的用来加稀释液和稀释血清,25微升的用来加血凝抗原可调的移液器要选择与检测过程中加样量相近量程的移液器,吸取液体时动作要轻缓,防止溶液吸入过快,冲入移液器污染柱塞或造成堵塞漏气。一定要养成移液器用完后放在移液器架上的****惯,移液器如果掉到地下很容易损坏。用完后移液器用75%的酒精棉擦拭,并把刻度调到最大值。