文档介绍：颁发部门质量部新订■修订□复审□页数共2页文件性质管理标准■操作标准□技术标准□文件编码原编编码起草年月日审核年月日批准年月日QC年月日执行日期年月日分发部门质量管理部、QC目的建立大肠菌群计数检验的标准操作程序,使操作过程规范化。适用范围适用于大肠菌群计数的检验操作。职责检验人员严格按检验操作规程进行检验。QC主管监督检查执行情况。程序1范围本方法适用于大肠菌群计数(coliforms)的测定2术语和定义21大肠菌群:在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:31恒温培养箱:36℃±1℃,30℃±1℃。32冰箱:2℃~5℃。33恒温水浴箱:46℃±1℃。34天平:感量为01g。35均质器。36振荡器。37无菌吸管:1mL(具001mL刻度)、10mL(具01mL刻度)或微量移液器及吸头。38无菌锥形瓶:容量500mL。39无菌培养皿:直径90mm。310pH计或pH比色管或精密pH试纸。311菌落计数器。4培养基和试剂41月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LaurylSulfateTryptose,LST)肉汤:见附录A中A1。42煌绿乳糖胆盐(BrilliantGreenLactoseBile,BGLB)肉汤:见附录A中A243磷酸盐缓冲液:见附录A中A3。44无菌生理盐水:见附录A中A4。45无菌1mol/LNaOH:见附录A中A5。46无菌1mol/LHCl:见附录A中A6。5检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mL稀释液,均质10倍系列稀释选择3个适宜稀释度的样品匀液,接种LST肉汤管36℃±1℃48h±2h不产气产气BGLB肉汤36℃±1℃48h±2h产气不产气大肠菌群阳性大肠菌群阴性查MPN表报告结果图1大肠菌群MPN计数法检验程序6操作步骤61样品的稀释611固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。612液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。613样品匀液的pH值应在65~75之间,必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。614用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。615根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。62初发酵试验每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料LST肉汤),36℃±1℃培养24h±2h,观察倒管内是否