文档介绍：武汉理工大学
硕士学位论文
枯草芽孢杆菌Mrp系统基因的克隆与表达研究
姓名:郭小明
申请学位级别:硕士
专业:应用化学
指导教师:谢浩
20091101
摘要#醴聪蛟靥迨欠植加谙赴ど系拇渭蹲T说鞍紫本课题选定嗜碱菌的载体作为研究对象。统,在调节嗜碱菌细胞质衡稳方面起关键作用。嗜碱菌膜蛋白系统介导的细胞外和胞内间的肥瞧涫燃钍视π缘闹匾;。鳱/反向载体是循环过程中的关键因素之一。/反向载体是存在于嗜碱菌的反向载体系统,是由七个基因编码的膜蛋白组成的异体蛋白复合体。本研究对枯草芽孢杆菌低郴蚪锌寺〖氨泶镅芯浚治隹莶菅挎吒司氖燃罨恚从而更有效的将嗜碱菌应用到工业生产中。本研究分为三个部分:畃泶镌靥骞菇ḿ癕融合蛋白的表达:本部分实验用际趵增得到僮葑拥闹饕;騧迦氲絧柿V校菇重组质粒甿⒂盟盖泻托蛄胁舛ǘ灾刈橹柿=行测定。┰龀、·,同样对一进行双酶切和序列测定。然后将重组质粒转入到大肠杆菌中进行表达研究,并且以含有鞍谆虻膒柿W霰泶锒哉铡J笛榻峁砻骱兄刈橹柿株诱导表达抽提膜蛋白跑甈⒚挥蟹⑾置飨缘谋泶铮琾柿5对照菌株能够正常表达。蟪Ω司嵝粤姿崦魑Dさ鞍妆泶锇槁碌难芯浚豪么蟪Ω珽作为表达伴侣,对膜蛋白进行了表达尝试。大肠杆菌酸性磷酸酶分布于大肠杆菌膜间隙,分子量约为湫蛄小⒐δ堋⒔峁挂延卸嗥N南妆ǖ肌1究翁馑《ū泶锏哪勘昴さ白为源于大肠杆菌的核苷酸转运蛋白和源于枯草芽孢杆菌的基于序列的拓扑学结构预测表明两种膜蛋白的硕嘉挥谀ぜ湎叮虼巳绻贜端连接表达伴侣,目标蛋白结构和功能被破坏和影响的几率较小。实验结果表明私岷狭薊腅甆虴甅芄唤幸煸幢泶铮/反向甿琾一、、的菌菌酸性磷酸酶反向载体系统的亚基,其中分子量为琈肿恿课。明能够作为表达伴侣促进膜蛋白表达。疕
蛋白作为膜蛋白表达伴侣的研究:#菇╬柿:.柿V泻蠱基因。具体步骤为,利用际踅玬蚽蚍直鸫雍邢嘤虻闹柿@┰龀隼矗盖邢化后作为插入片段,插入到载体中,构建..】重组质粒。含有重组质粒..腂暝贛嘌嘌覫杏盏急泶重组膜蛋白的研究。,说明芄蛔魑1泶锇槁麓俳さ鞍妆泶铩关键词:嗜碱菌,聪蜃T嗽靥澹琈系统,克隆表达甅—
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虢引獬卜讯嘲别州鹤卜料醐训¨/,/独创性声明学位论文使用授权书本人声明,所呈交的论文是本人在导师指导下进行的研究工作及论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得武汉理工大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说本人完全了解武汉理工大学有关保留、使用学位论文的规定,即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权武汉理工大学可以将本学位论文的全部内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存或汇编本学位论文。同时授权经武汉理工大学认可的国家有取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,明并表示了谢意。期:关机构或论文数据库使用或收录本学位论文,并向社会公众提供信息服务。C艿穆畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑
第引言嗜碱菌及其分布豢避,自从第一个嗜碱菌在年被发现以来,生物学家已经从土壤、碱湖、碱性泉甚至海洋中分离得到了大量不同类型的嗜碱菌。除古细菌外,真细菌、放线菌和真菌中的一些种,都是极端嗜碱菌。这些极端嗜碱菌既有厌氧类型的,也有好氧的类型,但它们有着一个共同的特点:均能在高碱环境下生活。截止到今天,嗜碱菌还没有确切的定义,根据耐受碱的程度不同,国内外学者作如下的区分荆嗜碱菌涸趐以上、在~之间最适或生长良好、但左右不能或仅能缓慢生长。耐碱菌能在生长,.荒苌ぁ最适生长为或ㄗㄐ院兼性嗜碱菌。..辈簧嗜中性菌与嗜碱菌的生长曲线口另外,对许多菌进行了发育学分析、化学分类或者表型分类,发现近的可能有新属存在,另外还有很多与嘟褂幸恍┚哂刑有的地位。格兰氏阴性菌更复杂,其中大部分未进行充分研究。借助基因,生物学家进行了系统发育学分析,发现嗜碱菌具有丰富的生物多样性,但是嗜碱菌的分类学工作仍需要进一步发展。嗜碱微生物分布广泛,许多种环境中都有嗜碱微生物的身影。在一般的中在极端嗜碱菌长;兼性嗜碱菌的最适生长≥.⑶
嗜碱菌的研究进展性土壤中,因为人为因素和生物因素形成的暂时的碱性环境,为嗜碱菌的生存提供了场所;或者嗜碱菌自身通过调节周围的微生态环境,形成了适合生长的局部的条件,因而嗜