文档介绍：免疫荧光技术1整理ppt一、一些基本概念和基本知识:1荧光免疫测定技术的概念:将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记,试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后,测定复合物中的荧光素,这种免疫技术,称为免疫荧光素技术。:⑴荧光抗体技术(荧光显微镜技术)抗原抗体反应后,利用荧光显微镜判定结果的检测方法。⑵免疫荧光测定技术:抗原抗体反应后,利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法3整理ppt荧光的产生:物质吸收外界能量而进入激发状态,在回复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放,即发光,这种光称为荧光。这种物质,称为荧光素由光激发所引起的荧光,为光致荧光------荧光免疫技术由化学反应所引起的荧光,为化学荧光------化学发光技术4整理ppt荧光素的荧光特性:⑴停止供能,荧光现象随即终止⑵对光的吸收和荧光的发射具高度选择性入射光波长<发射光波长⑶荧光效率:发射荧光的光量子数荧光效率=吸收光的光量子数⑷荧光猝灭现象:荧光素的辐射能力减弱5整理ppt5常见荧光素:⑴FITC⑵RB200⑶TRITC⑷镧系:Eu、Tb⑸PE⑹其它6整理ppt常见荧光素的特性:⑴FITC:黄色结晶粉末,吸收光:490~495nm,发射光:520~530nm,明亮的黄绿色荧光。⑵RB200:橘红色粉末,吸收光570nm,发射光595~600nm,橘红色荧光。⑶TRITC:紫红色粉末,吸收550nm,发射光620nm,橙红色荧光。⑷镧系:Eu、Tb⑸PE:吸收光490~560nm,发射光595nm,红色荧光。⑹其它:酶作用后产生荧光物质。7整理ppt酶作用后产生荧光物质:酶底物产物激发光发射光Β-GMUGMU360450APMUPMU360450HRPHPA二聚体3174148整理ppt合适荧光素的选择⑴具有与蛋白质形成共价键的化学基团。荧光素-N=C+NH-蛋白质荧光素-N-C-N-蛋白质‖︱︱‖︱SHHSH⑵荧光效率高,标记后下降不明显。⑶荧光色泽与背景色泽对比鲜明。⑷标记后能保持生物学活性和免疫活性⑸标记方法简单、快速。⑹安全无毒9整理ppt二、荧光抗体的制备1荧光素与抗体结合(标记)2荧光抗体的纯化3荧光抗体的鉴定10整理ppt