文档介绍：河南农业职业学院论文题目:鹅血清及卵黄中IgG的测定学生姓名:王乐乐学号:110580专业年级:高牧11-52013年4月22日目录鹅血清及卵黄中IgG的测定学生:赵冬冬专业:畜禽生产教育2004级指导教师:郎仲武摘要:免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG,简称IgG)指具有抗体活性的动物蛋白。在禽类,母代可以通过卵子将自身的免疫球蛋白传递给子代,对子代起到保护作用[20]。本试验应用ELISA对102枚吉林白鹅种蛋进行检测,检测项目为鹅胚发育过程卵黄中IgG和鹅胚血清中IgG的含量。结果表明,鹅胚血清中和卵黄中IgG含量是,/mL,()/mL。关键词:鹅;免疫球蛋白G;ELISA1前言卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白就是卵黄中的γ—卵黄球蛋白,由于其蛋白质的物理化学性质、免疫学性质等方面与哺乳动物免疫球蛋白存在一定差异[1,2],所以在免疫学领域把由禽卵黄中获得的抗体称为卵黄免疫球蛋白(ImmunoglobulinofYolk,简称IgY)[3]。IgY的用途是非常广泛、多样的,其中最重要的功能是由母体传递IgY给新生儿提供被动地免疫保护力。IgY普遍存在于鸟类、爬行动物和两栖类,在功能上等价于哺乳动物IgG,但其许多生物学性质仍未被发现。免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是指免疫系统受抗原刺激后,B细胞转化为浆细胞而产生的具有抗体活性,能与相应的抗原发生特异性结合的球蛋白,或指化学结构与抗体相似的球蛋白。它广泛存在于机体的血清、体液及粘膜分泌液中,是构成机体体液免疫的主要物质,免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE[4,5]。禽类已确证的免疫球蛋白有三种:即IgG(IgY)、IgM和IgA[6]。其中IgG是最主要的免疫球蛋白,约占动物血浆丙种球蛋白的70%,分子量约15万,含糖2~3%。IgG具有提高免疫力、增强机体抵抗力等作用。目前国内尚没有定量检测鹅IgG的相关报道。本文应用酶联接免疫吸附剂测定法(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay,简称ELISA)对鹅血清及卵黄中的IgG含量进行了测定,现将结果报告如下。(生化试剂)分析纯上海新兴生物有限公司氯化钠分析纯北京化工厂饱和硫酸氨Sephadex—G200分析纯北京鼎国生物有限公司辣根过氧化物酶分析纯北京鼎国生物有限公司鹅IgG、鼠抗鹅IgG抗体、、电子天平;40孔聚苯乙烯酶标反应板;XYJ80-1台式离心机;LD4-2A低速离心机;北京医用离心机厂;磁力搅拌器(78-1型磁力加热搅拌器)分光光度计751C型;酶联免疫检测仪DG—3022型;孵化器;冰箱;酸度计pHS-3C;ELISA板。,加生理盐水20mL,再逐滴加入(NH4)2SO4饱和溶液10mL,使成为20%(NH4)2SO4溶液,充分混合后,静置30min;3000rpm离心20min,弃沉淀;在上清液中再加(NH4)2SO4饱和溶液30mL,使成50%(NH4)2SO4溶液,充分混合,静置30min;离心20min,弃去上清;于沉淀中加入20mL生理盐水,使之溶解,再加(NH4)2SO4饱和溶液10mL,使成33%(NH4)2SO4溶液,充分混合后,静置30min;3000rpm离心20min,弃去上清,以除去白蛋白,重复3次;用10mL生理盐水溶解沉淀,装入透析袋;透析除盐,在常水中透析过夜,再在生理盐水中于4℃透析24h,中间换液数次,直至完全除去SO42﹣或NH4﹢离心去沉淀;离心去沉淀(去除杂质蛋白)上清液即为粗提的IgG;将G200凝胶活化、浮选、装柱,∕、平衡。并向其中加入上一步中所提取的粗提的IgG样本,以PBS液洗脱,收集第二蛋白洗脱峰,浓缩即为精提IgG。(4ml/份),取此混合液20mL,加生理盐水20mL,充分混合,逐滴加入35%饱和硫酸铵,边加边搅拌,混合均匀后静置30分钟,然后3000转/分钟离心20分钟,弃去沉淀,上清装入透析袋,常水流水透析12小时,然后生理盐水透析24小时,其间换液数次。最后将提取液浓缩至原体积,重复3次。分装冻存于-20℃冰箱。.