文档介绍：中国农业科学院
硕士学位论文
实时荧光PCR技术检测猪肺炎支原体研究
姓名:丁敏
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:朱鸿飞
20080601
摘要琈侵碇г宸窝椎闹饕2≡澹彩侵砗粑道病综合征琍的主要原发性病原之一。其主要危害是引起猪的生长受阻和饲料转化率大幅下降,严重影响养猪业的经济效益。,检测、菌落形成单位,检测、浓缩培养物的浊度测定等。鉴于上述方法费时费力,实验过程中容易污染,常引起鉴定、计数误差,本研究建立了可以对嘌锒康挠ü舛現甈觳夥椒ǎ⒂氪车腗定量检测方法进行了比较,为ぬ匦浴⑴嘌锒康认喙亓煊蜓芯刻峁┝耸笛橐谰荨1狙芯康闹饕D谌菁敖峁缦拢甈检测方法的建立:根据ú嫉腗保守区域基因序列,设计一对特异引物和探针,同时构建含有基因部分序列的标准质粒.,定量后作为模板,⒘。研究结果表明,该方法检测灵敏度可达/曜贾柿?奖词隒抵涞南咝怨系表达式为:一,;与常见的其他支原体、病毒和细菌无交叉反应;对起始浓度为×、,,两者差异不显著。证明该方法具有较高的灵敏度、良好的特异性和准确性。⑷侄糠椒ǖ谋冉希河τ肅检测法、,并进行简单相关同归分析。结果表明,在呐嘌讨校現甈与浊度法检测结果一直呈高度相关,其回归方程为.;在培养小时内,—隒法的检测结果呈高度相关,其回归方程为..。对回归方程进行检验,痬睦砺壑涤胧挡庵挡钜觳幌灾..琌的理论值与实测值差异不显著卸..R虼烁梅椒ㄓ泻芎玫氖视眯裕梢愿軫募觳饨峁扑愠鯩培养物的痬涤胱嵌取关键词:猪肺炎支原体,基因,荧光定量猪肺炎支原体嘌锏亩考觳夥椒ㄖ饕S醒丈ū浠ノ
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:泐年拢θ奔洌篴吆年拢蛉丁刍各论文作者签名:时间曲序‘月独创性声明关于论文使用授权的声明厂C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
≡≡8貌∈侵硖赜械囊恢纸哟バ源静。惴捍嬖谟谑澜绺鞴严重危害着养猪事业的发展钛迕鳎。这种病原聚集在猪的呼吸道内皮通过炎症反应而引起一种复杂的卡它性肺炎,越哟バ浴⒏叨却拘浴⒙浴⒏叻⒉÷屎偷退劳雎饰L氐悖要表现为咳嗽、呼吸困难,解剖可见肺组织肉样变或大理石样病变。猪群中母腥韭试%,由于生长率和饲料利用率降低引起养猪业的巨大经济损失隙∪剩郝匠衅剑。目前,国外在猪支气管肺炎的诊断、免疫、流行病学及治疗方面都进行着更深入研究,同时应用新技术、新方法结合细胞学、生物化学、病理学、免疫学、遗传学及分子生物学开展着广泛的研究,国内在这些方面的研究虽已取得一些可喜成绩,但还有一定差距。本节主要对囊些特点及国内外研究进展进行了综述。猪肺炎支原体是介于病毒和细菌之间的一类微生物,其在分类学中的具体位置为:∪剩。猪肺炎支原体由于缺乏细胞壁,呈现高度多形性,大小不等,在液体培养物和肺触片中常呈现球状,直径约.,偶有新月状、长链状。在固体培养基上,菌落极小,生长为圆形边缘光滑圆整,表面有致密的细纹,中央部位较稠密的菌落绿焓伲,不溶解马、牛、猪、小鸡血红细胞,营养要求复杂,培养严格好氧。猪肺炎支原体革兰氏染色为阴性,仅有窒赴器,即细胞膜、核糖体和拟核。电镜下可见细胞膜由愕ノ荒に钩桑穸仍嘉。细胞质内含有大量颗粒状、由钩傻