文档介绍：伴随生命科学和化学不停发展，大家对生物体认知已经逐步深入到微观水平。从单个生物体到器官到组织到细胞，再从细胞结构到核酸和蛋白分子水平，大家意识到能够经过检测分子水平线性结构（如核酸序列），来横向比较不一样物种，同物种不一样个体，同个体不一样细胞或不一样生理（病理）状态差异。这就为生物学和医学各个领域，提供了一个强有力技术平台。现在，常见分子生物学技术有以下多个[1]：
PCR单链构象多态性分析
PCR- 单链构象多态性分析(PCR- single strand conformation analysis,PCR- SSCP) 是多年来在基因突变检测中利用最广泛方法之一。PCR- SSCP 技术凭借突变可引发单链DNA三级构象改变,经过观察单链DNA在非变性聚丙烯酰***凝胶中迁移率漂移来判定突变。样品经PCR 扩增后，其产物经变性后能够产生2 条单链，假如存在基因突变，哪怕是一个碱基异常，单链构象也会发生改变，正常和突变DNA单链在聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE) 中，能够显现出不一样带型，从而确定野生型和突变型，PCR- SSCP 分析关键优点是简易且敏感性较高。不过该技术不能确定突变部位和性质。PCR- SSCP 突变检测敏感性随PCR 产物长度增加而降低，通常见于检测较小外显子突变。有时因为单个核苷酸改变所引发构象改变很小，用PAGE 电泳就可能无法检出，在PCR 产物或待测DNA 小于200 bp 时，PCR- SSCP 分析能够检测出70%~ 95%突变。假如以毛细管电泳替换PAGE，则可大为提升突变检测效率。
Wallace1997 年提出将PCR- SSCP 和异源DNA双链分析（heteroduplex analysis,HA) 相结合，称之为SSCP/ HA，部分PCR 产物经变性进行SSCP 分析以了解是否含有突变，其它PCR 产物直接用于电泳，以检出含有突变异源DNA双链，电泳凝胶经银染，单链DNA所形成带为橘黄或棕色，而双链DNA则表现为灰黑色。该综合手段能够单链构型多态性和异源双链构型分析两个不一样层次检出突变，是一个经济、快速突变检测手段，但无法提供突变位置信息。
PCR- SSCP 有很多改善技术，如RNA单链构象多态性法（PCR- rSSCP）、双脱氧测序单链片段构象多态分析（PCR- ddF）、限制酶指纹技术(PCR- REF) 等。PCR- rSSCP 法依据RNA构象对单个碱基替换更敏感原理，在PCR 引物上加上某类开启子，经过转录RNA构象体电泳迁移差异进行突变判别。PCR- ddF 法把PCR 产物转录，将转录物用反转录酶进行Sanger 双脱氧终止测序反应，经过观察非变性胶上经解链处理所产生单链漂移、突变后终止片段取得和缺失来判定突变。PCR- REF 法将RFLP 和SSCP 技术优势组合，将PCR 扩增待测片段用5~ 6 种限制酶依次消化，混合并进行末端标识，最终经变性处理并在非变性凝胶上电泳分离，从而取得来自片段长度和片段构象双重突变信息。
变性梯度凝胶电泳
变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE) 利用由碱基序列所决定DN***段溶解度或变性度差异，达成分离野生型和突变型DN***段目标，该手段分辨率达一个碱基。当DNA 双链沿变性剂浓度梯度增加
聚丙烯酰***凝胶迁移时，DNA分子中解链温度（Tm) 低部分逐步变性解链。通常总是错配碱基部分异源双链Tm最低，最轻易解链，其次是富含AT 碱基正确部位，富含GC碱基正确部位Tm值较高所以解链较难。所以，正常DNA双链和异源双链在梯度变性胶中电泳时，异源双链总是先解链。将PCR 产生双链DNA在浓度递增尿素和甲酰***变性聚丙烯酰***凝胶上电泳，当某一DN***段迁移到变性剂浓度和其最低Tm相当位置时，该片段低温解链部分双链打开，部分解链造成DNA迁移速度显著下降，观察样品迁移率改变即可判定是否存在变异。DGGE 敏感性高，即便异源双链中仅含一个错配碱基，在电泳时也可分辨其迁移率改变。DGGE 方法单碱基突变检出率在DN***段长度600 bp 以内能够达成95%。
DGGE 成功有赖于双链DNA内部低温解链部分变性后迁移率改变。但在相当于最高Tm变性剂浓度位置，对应DN***段可能全部解链，使试验无法检出存在于高Tm DN***段中碱基替换。为了处理此问题，能够在一个PCR 引物5 ' 端设计一段富含GC尾巴，从而使PCR 扩增产物一端富含GC 碱基对，确保了绝大多数DN***段不会发生完全解链，在最高变性剂浓度区域仍然能够分辨出部分解链异源双链，这一改善使DGGE 突变检出率靠近100%，但DGGE 只能检测突变是否存在而不能确定突变位置。
DGGE 方法需要设计