TCA蛋白沉淀方法.docx

文档介绍：100％（w/v）三***乙酸的配制方法：
500g三***乙酸用227ml水来溶解，所得溶液即100％三***乙酸溶液。避光，4度保存。
(preparationof100%TCA:454mlH2O/,use
gloves!!!).
培养基上清直接电泳跑出来的条带经常很难看，可以TCA沉淀浓缩后跑电泳，一
般表达量大于1mg/ml可以看到明显条带，这是我用的TCA沉淀方法，效果很好：
,离心5分钟，收集表达上清。
-1000ul上清于EP管中，加入1/9体积的100％TCA，颠倒10次混匀。
，过夜效果更好。
,离心10－20分钟,可见有棕黑色沉淀，倒掉上清，将EP管倒扣在吸水
纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。
，37度烘箱10－20分钟，待管底无明显液体残留，如
果管壁还残留有液体，可以吸水纸吸掉。可以改成室温或用电吹风，关键是除去
管底和管壁残余液体。
,离心10－20分钟,用20ul枪头尽量吸去管底残余的液体，此步骤要快，
不然沉淀容易散开，降低蛋白回收率，一般最多几ul或者没有，注意不要吸到
沉淀。
，37度烘箱5分钟，确认管壁和管底没有液体残留。
－50ulLoadingbuffer，95度加热10nim，一般沉淀会自动溶解，如果不
溶，用手指轻弹管壁或用20ul枪头轻轻吸打，注意整个操作尽量不要碰到管壁，因为管壁可能沾有残余TCA。如果蓝色的Loadingbuffer不变成黄色，说明残余
TCA吸弃了干净，如果变黄，一般不影响电泳。此方法连***洗这一步都省了，
而且不影响电泳效果。
或者第5步和第6步改为***洗:
***，用手指轻弹EP管，洗去管底和管壁残余的TCA。
,离心10－20分钟,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除
去残余在管口的液体。
TCA-DOC
Forprecipitationofverylowproteinconcentration
1)Toonevolumeofproteinsolution,add1/%DOC(Nadeoxycholate,detergent).
2)Vortexandletsitfor30minat4oC.
3)Add1/10ofTrichloroaceticacid(TCA)100%vortexandletsitONat4oC(preparationof
100%TCA:454mlH2O/,usegloves!!!).
4)Spin15min4oCinmicrofugeatmaximumspeed(15000g).Carefullydischargesupernatant
andretainthepellet:drytubebyinversionontissuepaper(pelletmaybedifficulttosee).
[OPTION:Was